台盼蓝染色液 Typan Blue Solution

台盼蓝（Trypan Blue），一种偶氮、亲水性酸性蓝色染料，可透过死亡细胞和垂死细胞的细胞膜，将其染成蓝色，而活细胞由于其细胞膜的完整性，可将台盼蓝排斥在外，因此，通过颜色的变化即可将活细胞（活细胞呈透明无色）和死细胞鉴别开来，基于此原理，本品广泛用于细胞活性水平的常规评估。台盼蓝还可染色胶原和淀粉样蛋白。台盼蓝与蛋白结合形成的复合物可发出红色荧光。另外，台盼蓝（合适浓度）还常用来淬灭细胞表面的自荧光或者其他荧光信号。

本品为溶于生理盐溶液的0.4%（w/v）台盼蓝染色液，以无菌形式提供，细胞培养级别。

运输和保存方法

室温运输和保存即可，二年有效。

注意事项

1）细胞计数前，需要用生理盐缓冲液或者无血清培养基对细胞进行充分的清洗，因为细胞对血清蛋白具有非常高的亲和力，残留的血清蛋白会导致较暗的染色背景。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）对于悬浮细胞，离心收集细胞，充分清洗后，用适当缓冲液如PBS，HBSS重悬制成单细胞悬液；对于贴壁细胞，先用胰|酶消化细胞，再按照悬浮细胞的方法制备单细胞悬液。

2）取0.5ml单细胞悬液，按照1:1比例与0.5ml 0.4%台盼蓝染色液充分混匀，室温染色3~10min。

【注1】：因台盼蓝具有细胞毒性，染色时间过久会导致部分死细胞染色，干扰计数。

【注2】：若细胞密度比较高，可取0.2ml单细胞悬液，经适当缓冲液稀释到0.5ml，之后再用0.5ml 0.4%台盼蓝染色液染色。

3）取少量上述染色细胞加入血细胞|计数板，于显微镜低倍镜下计数，分别计算着色细胞（即损伤细胞和死细胞）和总细胞。

【注1】：用移液枪加染色细胞时，沿着盖玻片的边缘轻轻加液使其*覆盖住整个小室。不可过量加液或者不足量。

【注2】：1mm2方格内细胞数通常控制在20-50 cells，当细胞数超过200个，需重新调整稀释倍数。

4）按照以下公式来计算细胞数目和活细胞百分比，

a，计算每ml细胞数目：Cells/ml=1mm2大方格内的平均细胞数×稀释倍数×104；【注】：此时的稀释倍数为：步骤2所取的单细胞悬液与台盼蓝染色液混合后的稀释倍数

b，总细胞数目：Total cells=（Cells/ml）×zui初制备单细胞悬液的总体积

c，细胞活力值：Viability（%）=（总细胞数-总着色细胞数）/总细胞数 ×100

【注】：通常情况，健康的对数期培养细胞，活细胞至少占到95%。

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