His标签蛋白纯化磁珠

20561ES03His标签蛋白纯化磁珠

参考价: ¥198

具体成交价以合同协议为准
2023-12-11 17:34:36
438
属性:
供货周期:现货;规格:1ml;货号:20561ES03;应用领域:医疗卫生,化工,生物产业;
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规格:
1 ml;
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产品属性
供货周期
现货
规格
1ml
货号
20561ES03
应用领域
医疗卫生,化工,生物产业
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His标签蛋白纯化磁珠

参考价: ¥198

1 ml 198元 99 件可售
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

His-tag蛋白纯化磁珠是一种高容量的新型磁性微球产品,用于快速、高效的纯化 His标签融合蛋白。磁珠在磁场作用下直接从生物样品中可一步纯化出高达95%纯度的目的蛋白,极大的简化了纯化工艺和提高纯化效率。

详细介绍

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

HisSep Ni-NTA MagBeads His标签蛋白纯化磁珠

20561ES03

1 mL

198.00

20561ES08

5 mL

598.00

产品描述

His-tag蛋白纯化磁珠是一种高容量的新型磁性微球产品,用于快速、高效的纯化 His标签融合蛋白。磁珠在磁场作用下直接从生物样品中可一步纯化出高达95%纯度的目的蛋白,极大的简化了纯化工艺和提高纯化效率。将含有His标签蛋白的细胞裂解物添加到MagBeads 中,让蛋白质与充分结合,然后可从磁珠中洗脱分离出目的蛋白。

与传统柱层析方法相比,使用磁珠纯化His标签蛋白无需控制上样流速和多次离心样品,也不需要昂贵的层析和离心设备样品与磁珠的结合以及目的蛋白与磁珠的分离简单、快捷,而且更容易实现高通量、自动化的蛋白纯化方法。适合科研和工业客户高通量地进行标签蛋白的纯化。

该磁珠4%琼脂糖凝胶为基质通过化学方法偶联了四配位的氮川三乙酸(NTA),螯合镍离子(Ni2+)后,可以形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体的中心,这样的结构很有效的保护了镍离子免受小分子的进攻更加稳定

His标签蛋白纯化磁珠广泛适用于细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等分泌或胞内表达的可溶性标签蛋白,也可用于变性蛋白的纯化(包涵体需变性后再进行纯化

产品性质

基质

磁性琼脂糖微球

载量

> 40 mg 6×His-tagged protein/mL磁珠

粒径

30-100 μm

磁珠浓度

磁珠悬浮于保护液中,含量为20%(V/V)

储存缓冲液

含20%乙醇的1×PBS

运输保存方法

冰袋运输。4℃长期储存,有效期2年。

注意事项

1.磁珠保存过程中避免冷冻干燥和高速离心等操作。

2.磁珠使用前,请充分震荡,使磁珠保持均匀的悬浮状态。

3.使用过的磁珠重复使用时,建议纯化同一种蛋白,纯化不同种蛋白时,建议使用新磁珠,以避免交叉污染。

4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5.本产品仅作科研用途!

使用方法

一、缓冲液配制

1.缓冲液使用基本原理咪唑上样,高咪唑洗脱,或者高pH上样,低pH洗脱。

2.Buffer在使用前最好用0.22 μm或者0.45 μm滤膜过滤除菌。

3.可溶性蛋白纯化所需缓冲液及配方详见1包涵体蛋白纯化所需缓冲液及配方详见2和表3


二、样本制备

2.1细菌或酵母表达的蛋白

1)将培养液转移到离心杯中,7,000 rpm (7,500 xg),离心15 min收集菌体,然后按照菌体:Lysis Buffer=1: 10 W/V)加入Lysis Buffer加入终浓度为1 mMPMSF。同时可加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与磁珠的结合。

2)加入,使其工作浓度为0.2-0.4 mg/mL如果表达的宿主细胞内含pLysSpLysE可以不加

3)将菌体沉淀悬浮起来,(如果菌液浓度高,也可考虑加入10 μg/mL RNase A5 μg/mL DNase I,,冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。

4)将澄清的破碎液转移至离心管中10,000 rpm (15,000 xg),4离心20-30 min 取上清,置于冰上备用或-20保存。

2.2酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达可溶性蛋白

1)将细胞培养液转移至离心杯5,000 rpm (3,800 xg),离心10 min收集菌体得上清,如上清中不含EDTA、和还原剂等物质,即可直接使用;如含有EDTA、和还原剂等物质,需用Lysis Buffer透析才能上样

2)对于大量体积的上清,需加入硫酸铵沉淀浓缩后,然后Lysis Buffer透析后才能上样

2.3包涵体蛋白纯化(变性条件)

1)将培养液转移到离心杯中,7,000 rpm (7,500 xg),离心15 min收集菌体,去掉上清。

2)按照菌体:Lysis buffer不含8M尿素=1:10 (W/V)菌体悬浮起来,混匀,冰浴超声破碎。

3)将破碎液转移至离心管中,10,000 rpm (15,000 xg),4离心20-30 min去掉上清,步骤2和3可以重复一次。

4)按照菌体:Lysis buffer(含8M尿素=1:10 (w/v)的比例将包涵体充分悬浮。

三、磁珠预处理

3.1 准备

磁珠充分混匀,使用移液器取适量的磁珠悬浮液,置于离心管中,将离心管置于磁力架上,待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清

3.2平衡

将离心管从磁力架上取下来,加入与悬浮液等体积的Lysis Buffer使用枪头反复吹打5-10次,将离心管置于磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸弃清液,重复洗涤2次。

四、磁珠与目的蛋白结合

4.1 结合

含有目的蛋白的上清液加入到处理好的磁珠中,颠倒混匀。将离心管置于混合仪上,室温旋转孵育30 min (如果目标蛋白不稳定,建议2-8下孵育1 h)。

4.2 洗杂

将离心管置于磁分离器,待溶液变澄清后,用移液器移出上清液,保留上清液,以备取样检测。向离心管中加入2倍悬浮液体积的Wash Buffer使用枪头反复吹打5-10次,将离心管置于磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸取上清液,保留,以备取样检测。重复上述步骤2次。

4.3 洗脱

建议将3-5倍磁珠体积的Elution Buffer加入到离心管中,使用移液器轻轻吹打3-5次,混匀,将离心管置于磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸取上清液,即为目的蛋白。如有需要可以重复上述步骤1次,以提高目的蛋白的回收量。用户也可根据实验结果调整缓冲液中的咪唑浓度。

五、磁珠保存

1. 向装有磁珠的离心管中加入1 mL Elution Buffer用移液器反复吹打3-5次,使磁珠充分悬浮然后置于磁分离器,吸弃上清,重复该操作2次。

2. 向离心管中加入1 mL去离子水,用移液器反复吹打3-5次,使磁珠充分悬浮,然后置于磁分离器,吸弃上清,重复该操作2次。

3. 向离心管中加入含20%乙醇的1×PBS使总体积为磁珠初始悬浮液体积,保存于2-8 ℃。

六、SDS-PAGE 检测

将纯化得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分)使用SDS-PAGE检测纯化效果


1. 可溶性His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方

缓冲液名称

配方

配制1L溶液所需各种试剂量

Lysis Buffer

50 mM NaH2PO4

300 mM NaCl

10 mM imidazole

NaOH调pH至8.0,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         0.68 g

Wash Buffer

50 mM NaH2PO4

300 mM NaCl

20 mM imidazole

NaOH调pH至8.0,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         1.36 g

Elution Buffer

50 mM NaH2PO4

300 mM NaCl

250 mM imidazole

NaOH调pH至8.0,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌

NaH2PO4 ·2H2O    7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         17.0 g

以上缓冲液适用于多数His标签蛋白的纯化,客户根据实验结果调整缓冲液中的咪唑浓度。

2. 包涵体His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方,pH洗脱方式

缓冲液名称

配方

配制1L溶液所需各种试剂量

Lysis Buffer

8 M Urea

100 mM NaH2PO4

100 mM Tris·HCl

盐酸溶液调pH至8.0,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·H2O   13.80 g

Tris·Cl            12.10 g

Wash Buffer

8 M Urea

100 mM NaH2PO4

100 mM Tris·HCl

盐酸溶液调pH至6.3,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·H2O    13.80 g

Tris·Cl            12.10 g

Elution Buffer

8 M Urea

100 mM NaH2PO4

100 mM Tris·HCl

盐酸溶液调pH至4.5,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·H2O     13.80 g

Tris·Cl           12.10 g

3. 包涵体His标签蛋白纯化所需缓冲液及配方,咪唑洗脱方式

缓冲液名称

配方

配制1L溶液所需各种试剂量

Lysis Buffer

8 M Urea

50 mM NaH2PO4

300 mM NaCl

10 mM imidazole

NaOH调pH至8.0,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·2H2O   7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         0.68 g

Wash Buffer

8 M Urea

50 mM NaH2PO4

300 mM NaCl

20 mM imidazole

NaOH调pH至8.0,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·2H2O   7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         1.36 g


Elution Buffer

8 M Urea

50 mM NaH2PO4

300 mM NaCl

250 mM imidazole

NaOH调pH至8.0,0.22 µm或0.45 µm过滤除菌

Urea             480.50 g

NaH2PO4 ·2H2O   7.80 g

NaCl             17.54 g

Imidazole         17.0 g

4. Ni NTA Magarose Beads试剂耐受情况

试剂种类

浓度

还原剂

5 mM DTE

1 mM DTT

20 mM β-mercaptoethanol

5 mM TCEP

10 mM reduced glutathione

变性剂

8 M urea

6 M Gua-HCl

去污剂

2% TritonTM X-100, nonionic

2% TweenTM20, nonionic

2% NP-40, nonionic

2% Cholate, anionic

1% CHAPS, zwitterionic

其他类

500 mM imidazole

20% ethanol

50% glycerol

100 mM Na2SO4

1.5 M NaCl

1 mM EDTA

60 mM citrate

HB220315



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