Yeasen/翌圣生物 品牌
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￥228Bradford Protein Quantification Kit
Bradford蛋白浓度测定试剂盒
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
Bradford Protein Quantification Kit | 20202ES76 | 500T | 4℃ | 98.00 |
Bradford蛋白浓度测定试剂盒 | 20202ES86 | 2500T | 4℃ | 398.00 |
产品描述
Bradford蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据Bradford染液（考马斯亮蓝G-250染料）与蛋白结合，使染料的zui大吸收峰从A456变为A595，且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值，推算蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高，比Lowry法大约高四倍，zui低蛋白检测量可达1μg。测定速度快、简单，仅需一种试剂即可，且不受大多数样品中化学试剂的影响。
我司提供二种规格的Bradford蛋白浓度检测试剂盒，比色皿法分别可做125次和625次。酶标法分别可做500次和2500次。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
20202ES76 (500T) | 20202ES86 (2500T) | ||
20202-A | Bradford蛋白染色液 | 125ml | 5×125 ml |
20202-B | 蛋白标准品（BSA） | 5×1ml（2mg/ml） | 5×2ml（2mg/ml） |
运输与保存方法
冰袋运输。
染色液4℃保存，蛋白标准品常温或4℃保存，有效期一年。
注意事项
1）Bradford染色液使用前，应充分混匀。同时，酶标仪需预热20min。
2）Bradford染色液需恢复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。另，使用前需颠倒几次以充分混匀。
3）由于Bradford染液的颜色反应并不是同递增的蛋白浓度呈线性关系，因此每次试验都必须建立标准曲线。另外，为了得到更精确的结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
4）Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好，比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会受到略高浓度的去垢剂影响，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015%等。对于含去垢剂的样品，建议使用BCA增强型蛋白定量检测试剂盒【货号：20201ES76】。
5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作方法
一、配制标准品
1. 配制BSA标准品体系
【注】：标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。
BSA标准品体系配制可参考表一。
表一BSA标准品体系配制（微孔板检测，线性范围100-1500μg/ml）
Vial | 稀释液体积(μl) | 2mg/ml BSA体积(μl) | BSA终浓度(μg/ml) |
A | 0 | 100 | 2000 |
B | 25 | 75 | 1500 |
C | 50 | 50 | 1000 |
D | 125 | 75 | 750 |
E | 150 | 50 | 500 |
F | 350 | 50 | 250 |
G | 375 | 25 | 125 |
H | 395 | 5 | 25 |
I | 400 | 0 | 0=Blank |
二、检测方法
A. 标准比色皿检测（线性范围：100-1500μg/ml）
1）各取20μl不同浓度标准品和待测样品加入到反应管中；
2）加入1ml Bradford染色液，混匀。室温孵育10min。【注】：样本室温孵育时间不可超过1h；
3）分光光度计上测定595nm处的吸光度，用装满水的比色皿对仪器校零。之后测定所有样本浓度。
4）根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即zui终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度μg/ml；Y-zui终的OD595nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
B. 标准微孔板检测（线性范围：100-1500μg/ml）
1）各取5μl各浓度标准品和待测样品加入到微孔板中；
2）每孔加入250μl Bradford染色液，振荡30s充分混匀。盖上微孔板，室温孵育10min。【注】：样本室温孵育时间不可超过1h；
3）酶标仪上测定595nm处的吸光度。或者其他575~615nm波长范围内的吸光度，但是相对于595nm，吸光度会存在~10%的损失。
4）根据BSA标准品的吸光度（减去标准品中空白孔的OD值即zui终的读数），绘制标准曲线（X-蛋白浓度μg/ml；Y-zui终的OD595nm）。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
【注】：a）由于酶标板的光径比比色皿短，经酶标板检测得到的OD595nm会低于比色皿检测所得，因此可能降低本法的检测下限。要得到更高的OD595nm，可使用7-10μl标准品/待检样本，和250μl Bradford染色液来进行检测。b）如果使用与酶标仪相关的曲线拟合算法（curve fitting algorithm），那么四参数或者*拟合曲线可能得到更为精确的结果，并不是单纯的线性拟合。若是手动标记各点浓度，点-点曲线出来的结果精确于线性拟合。若对结果准确性的要求不是非常严格，可使用线性拟合分析数据。
附录
表：Brandford蛋白浓度测定的兼容性
名称（盐/缓冲液） | 耐受浓度 |
ACES, pH 7.8 | 100mM |
Ammonium sulfate | 1M |
Asparagine | 10mM |
Bicine, pH 8.4 | 100mM |
Bis-Tris, pH 6.5 | 100mM |
Borate (50mM), pH 8.5 | undiluted |
Calcium chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
Na-Carbonate/Na-Bicarbonate (0.2M), pH 9.4 | undiluted |
Cesium bicarbonate | 100mM |
CHES, pH 9.0 | 100mM |
Na-Citrate (0.6M), Na-Carbonate (0.1M), pH 9.0 | undiluted |
Na-Citrate (0.6M), MOPS (0.1M), pH 7.5 | undiluted |
Cobalt chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
EPPS, pH 8.0 | 100mM |
Ferric chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
Glycine | 100mM |
Guanidine?HCl | 3.5M |
HEPES, pH 7.5 | 100mM |
Imidazole, pH 7.0 | 200mM |
MES, pH 6.1 | 100mM |
MES (0.1M), NaCl (0.9%), pH 4.7 | undiluted |
MOPS, pH 7.2 | 100mM |
Nickel chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
PBS; Phosphate (0.1M), NaCl (0.15M), pH 7.2 | undiluted |
PIPES, pH 6.8 | 100mM |
RIPA lysis buffer; 50mM Tris, 150mM NaCl,0.5% DOC, 1% NP-40, 0.1% SDS, pH 8.0 | 1/10 dilution* |
Sodium acetate, pH 4.8 | 180mM |
Sodium azide | 0.5% |
Sodium bicarbonate | 100mM |
Sodium chloride | 5.0M |
Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4 | 200mM |
Sodium phosphate | 100mM |
Tricine, pH 8.0 | 100mM |
Triethanolamine, pH 7.8 | 100mM |
Tris | 2M |
TBS; Tris (25mM), NaCl (0.15M), pH 7.6 | undiluted |
Tris (25mM), Glycine (192mM), pH 8.0 | undiluted |
Tris (25mM), Glycine (192mM), SDS (0.1%), pH 8.3 | 1/2 dilution* |
Zinc chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
名称（变性剂） | 耐受浓度 | 还原剂以及巯基试剂 | 耐受浓度 |
Brij?-35 | 0.125% | Dithiothreitol (DTT) | 5mM |
Brij-56, Brij-58 | 0.031% | Glucose | 1M |
CHAPS, CHAPSO | 5.0% | Melibiose | 100mM |
Deoxycholic acid | 0.05% | 2-Mercaptoethanol | 1M |
Lubrol? PX | 0.125% | Potassium thiocyanate | 3M |
Octyl β-glucoside | 0.5% | Thimerosal | 0.01% |
Nonidet P-40 (NP-40) | 0.5% | Misc. Reagents & Solvents | 耐受浓度 |
Octyl β-thioglucopyranoside | 3.0% | Acetone | 10% |
SDS | 0.125% | Acetonitrile | 10% |
Span? 20 | 0.5% | Aprotinin | 10mg/L |
Triton? X-100, X-114 | 0.125% | DMF, DMSO | 10% |
Triton X-305, X-405 | 0.5% | Ethanol | 10% |
Tween?-20 | 0.062% | Glycerol (Fresh) | 10% |
Tween-60 | 0.1% | Hydrochloric Acid | 100mM |
Tween-80 | 0.062% | Leupeptin | 10mg/L |
Zwittergent? 3-14 | 0.025% | Methanol | 10% |
螯合剂 | 耐受浓度 | Phenol Red | 0.5mg/mL |
EDTA | 100mM | PMSF | 1mM |
EGTA | 2mM | Sodium Hydroxide | 100mM |
Sodium citrate | 200mM | Sucrose | 10% |
还原剂以及巯基试剂 | 耐受浓度 | TLCK | 0.1mg/L |
N-acetylglucosamine in PBS, pH 7.2 | 100mM | TPCK | 0.1mg/L |
Ascorbic acid | 50mM | Urea | 3M |
Cysteine | 10mM | o-Vanadate (sodium salt), in PBS, pH 7.2 | 1mM |
Dithioerythritol (DTE) | 1mM |
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