Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
Standard Grade 牛血清白蛋白
¥238蛋白酶抑制剂Cocktail,EDTA-free
面议RIPA裂解液(强)
面议His标签蛋白琼脂糖纯化树脂
¥498小鼠抗β-actin单克隆抗体
面议ECL化学发光超敏显色试剂盒
面议Human Recombinant Insulin 重组-人胰岛素
¥320鼠源RNase抑制剂(Murine RNase Inhibitor)
面议Streptavidin链霉亲和素
面议过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L)
面议Human IgG 人免疫球蛋白G
面议NP-40 Lysis Buffer NP-40裂解液
¥228BCA Protein Quantification Kit
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) | 20201ES76 | 500T | 278.00 |
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) | 20201ES86 | 2500T | 778.00 |
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) | 20201ES90 | 5000T | 1518.00 |
产品描述
BCA(Bicinchoninic acid)法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应,即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+,产生一种紫蓝色复合物,在562nm处有高的吸光值,该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。
该BCA蛋白浓度测定试剂盒可用于比色皿法检测,也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量(100μL)的蛋白样品,但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20(v/v),从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便,仅需少量(10-25μL)的蛋白样品。不过,由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8(v/v),某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低低检测水平。我司提供三种规格的BCA蛋白浓度检测试剂盒,比色皿法分别可做50次,250次,500次。酶标法分别可做500次,2500次,以及5000次。
产品特点
1)灵敏度高,小检测蛋白量可达0.2μg,检测浓度下限达到10μg/mL。
2)速度快,比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。
3)线性范围广,20-2000μg/mL浓度范围内有较好的线性范围。
4)不受大部分样品中的化学物质的影响,详情见附表1。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 | 储存 | ||
20201ES76(500T) | 20201ES86(2500T) | 20201ES90(5000T) | |||
20201-A | BCA试剂A | 100mL | 500mL | 2×500mL | 4℃ |
20201-B | BCA试剂B | 3mL | 15mL | 2×15mL | 4℃ |
20201-C | 蛋白标准品(BSA) | 5×1mL(2mg/mL) | 10×1mL(2mg/mL) | 10×2mL(2mg/mL) | 4℃ |
运输与保存方法
冰袋运输。试剂盒中的A、B液室温或4℃保存;蛋白标准品(BSA)长时间不用,可置于-20℃保存,有效期12个月。
注意事项
1)使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,因此需注意保持定时和定温,以确保精确定量。
2)低温或长期保存,若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生。请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染,则应丢弃,避免对实验结果造成影响。
3)实验操作规范,提高上样量的精确度。
4)每次测定都需做相应的标准曲线,因为显色反应与温度和时间的变化有关,精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。
5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作方法
一、配制标准品和工作液
1. 配制BSA标准品体系
标准品稀释液为蛋白样品的溶解液,原则上蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。BSA标准品体系配制可参考表1和表2。
表1 BSA标准品体系配制(比色皿检测,线性范围20-2000μg/mL)*
Vial | 稀释液体积(μL) | 2mg/mL BSA体积(μL) | BSA终浓度(μg/mL) |
A | 0 | 100 | 2000 |
B | 25 | 75 | 1500 |
C | 50 | 50 | 1000 |
D | 125 | 75 | 750 |
E | 150 | 50 | 500 |
F | 350 | 50 | 250 |
G | 375 | 25 | 125 |
H | 395 | 5 | 25 |
I | 400 | 0 | 0=Blank |
*如用比色皿检测,每管需加100μL标准品,按3个重复计算,每个浓度至少需配制300μL。
表2 BSA标准品体系配制(微孔板检测,线性范围20-2000μg/mL)*
Vial | 稀释液体积(μL) | 2mg/mL BSA体积(μL) | BSA终浓度(μg/mL) |
A | 0 | 30 | 2000 |
B | 9 | 21 | 1400 |
C | 12 | 18 | 1200 |
D | 15 | 15 | 1000 |
E | 21 | 9 | 600 |
F | 24 | 6 | 400 |
G | 27 | 3 | 200 |
H | 49 | 1 | 40 |
I | 30 | 0 | 0=Blank |
2. 配制BCA工作液
1)计算所需要的总BCA工作液体积。
总BCA工作液体积=(标准品+待测样品)×重复数×每个样品所需要的BCA工作液
【注】:比色皿检测时每个样品加2.0mL BCA工作液,微孔板检测每个样品加200μL BCA工作液。
2)配制BCA工作液:50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B(A:B=50:1),充分混匀。
【注】:BCA试剂B加入BCA试剂A中后,迅速浑浊,通过混匀后立即变澄清。BCA工作液装入密封容器内,室温条件24h稳定。
二、检测方法
1. 比色皿检测方法(样品:BCA工作液=1:20)
1)各取100μL标准品和待测样品加入到反应管中。
2)每管加入2.0mL BCA工作液,混匀。37℃孵育30min。
【注】:也可室温孵育2h,或者60℃孵育30min。BCA检测蛋白浓度,延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限,以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低,可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。
3)冷却到室温。分光光度计检测,设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。在10分钟内对所有样品读数。
【注】:由于BCA反应达不到真正的反应终点,即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是,由于室温下生色比率相当低,因此若是10min内能对所有的样本进行562nm吸光度的测试,不会导致明显错误。
4)根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度ug/mL;Y-终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
2. 微孔板检测方法(样品:BCA工作液=1:8)
1)各取25μL标准品和待测样品加入到微孔板中。
【注】:样品与工作液比例为1:8,若样品有限,可使用10μL标准品和待检测样品进行检测(即1:20),这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/mL。
2)每孔加入200μl BCA工作液,振荡30s充分混匀。盖上微孔板,37℃孵育30min。
3)冷却到室温,在酶标仪上的540-595nm波长范围处检测吸光度,其中562nm波长为*。
【注】:a)由于酶标板的光径比比色皿短,使得酶标板检测需要更好的样品:BCA工作比率来获得相同的检测灵敏度。若使用高于562nm的检测波长,建议延长孵育时间到2h。b)延长孵育时间或者提高样品:BCA工作比会增高每个孔的OD562nm净值,并且降低检测下限和工作线性范围。
4)根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度ug/mL;Y-终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
附表:BCA蛋白浓度测定的兼容性
名称 | 耐受浓度 |
Sodium bicarbonate | 100mM |
Sodium phosphate | 25mM |
2-Mercaptoethanol | 0.01% |
Glycercol (pure) | 10% |
Glycine-HCl, pH2.8 | 100mM |
HEPES | 100mM |
Hydrochloric acid | 100mM |
Leupeptin | 10mg/L |
Nickel chloride (in TBS, pH8.0) | 10mM |
Nonidet P-40 (NP-40) | 5%(w/v) |
Octyl β -glucoside | 5%(w/v) |
Potassium thiocyanate | 3.0M |
SDS | 5% |
Sodium acetate, pH4.8 | 200mM |
Sodium azide | 0.20% |
Sodium hydroxide | 100mM |
Sucrose | 40% |
Triton X-100 | 5% |
Triton X-114, X-305,X-405 | 1% |
Tween-20, Tween-60, Tween-80 | 5% |
Zwittergent | 1% |
ACES, pH7.8 | 25mM |
Acetone | 10% |
Acetonitrile | 10% |
Ammonium sulfate | 1.5mM |
Aprotinin | 10mg/L |
Bicine, pH8.4 | 20Mm |
Bis-Tris, pH6.5 | 33mM |
Borate, pH8.5 | 50mM |
Brij-35 | 5% |
Brij-52 | 1% |
Brij-56, Brij-58 | 1% |
BugBuster protein Extraction Reagent (Cat. No. 70584) | nointerference(undiluted) |
Calcium chloride (in TBS, pH8.0) | 10mM |
CelLytic B Reagent | nointerference(undiluted) |
Cesium bicarbonate | 100mM |
CHAPS | 5% |
Cobalt chloride (in TBS, pH8.0) | 0.8mM |
CytoBuster Protein Extraction Reagent (Cat. No. 71009) | nointerference(undiluted) |
Deoxycholic acid | 5% |
Dithioerythritol (DTE) | 1mM |
Dithiothreitol (DTT) | 1mM |
DMF | 10% |
DMSO | 10% |
EDTA | 10mM |
EPPS, pH8.0 | 100mM |
Ethanol | 10% |
Ferric chloride (in TBS, pH8.0) | 10mM |
Glucose | 10mM |
Glycerol | 10% |
Guanidine-HCl | 4M |
Imidazole, pH7.0 | 50mM |
MES, PH6.1 | 100mM |
Methanol | 10% |
MOPS, pH7.2 | 100mM |
N-Acetyglucosamine(10mM)in PBS, pH7.2 | 10mM |
Octyl β-thioglucpyranoside | 5% |
PIPES, pH6.8 | 100mM |
PMSF | 1mM |
PopCulture Reagent (Cat. No. 71092) | nointerference(undiluted) |
Reportasol Extraction Buffer (Cat. No. 70909) | nointerference(undiluted) |
Sodium chloride | 1M |
Sodium citrate, pH4.8 or pH6.4 | 200mM |
Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2 | 1mM |
Span 20 | 1% |
TBS (150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH8.0) | nointerference(undiluted) |
Thimerosal | 0.01% |
TLCK | 0.1mg/L |
TPCK | 0.1mg/L |
Tricine, pH8.0 | 25mM |
Triethanolamine, pH7.8 | 25mM |
Tris | 250mM |
Tris(hydroxypropyl)phosphine (THP) | 1mM |
Urea | 3M |
Zinc chloride (in TBS, pH8.0) | 10mM |
HB200224