Indo-1, AM钙离子荧光探针

40775ES50Indo-1, AM钙离子荧光探针

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2022-04-08 15:43:53
670
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供货周期:现货;规格:50 μg;货号:40775ES50;应用领域:医疗卫生,生物产业;
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产品属性
供货周期
现货
规格
50 μg
货号
40775ES50
应用领域
医疗卫生,生物产业
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

Indo-1, AM钙离子荧光探针是一种细胞生物学常用的细胞可渗透钙离子荧光探针,与Fura-2为目前使用广泛的比率法测定的钙荧光指示剂,Indo-1能特异性地结合Ca2+,同时可发出荧光,结合Ca2+后的大发射波长从结合前的475 nm向400 nm(Ca2+饱和时)偏移,该信号变化可被流式细胞仪较好的捕捉

详细介绍

Indo-1, AM,Cell Permeable 细胞可渗透钙离子荧光探针


产品信息


产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Indo-1, AM,Cell Permeable Indo-1, AM钙离子荧光探针

40775ES50

50 μg

248.00

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产品描述


Indo-1是一种细胞生物学常用的钙离子荧光探针,与Fura-2为目前使用广泛的比率法测定的钙荧光指示剂,Indo-1能特异性地结合Ca2+,同时可发出荧光,结合Ca2+后的大发射波长从结合前的475 nm向400 nmCa2+饱和时)偏移该信号变化可被流式细胞仪较好的捕捉:在氩离子激光器的351-364光谱范围内单一波长激发该探针,在400 nm和475 nm的波长处分别检测结合钙离子和未结合钙离子的荧光信号,通过二者荧光强度的比率测定钙离子浓度。

由于Indo-1是极性大的酸性化合物,无法进入细胞内,为此在其负性基团上结合乙酰氧甲酯,使其成为Indo-1/AM,该变化既增加了酯溶性又消除了负电荷,极大的提高了细胞渗透性。在细胞内,Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可与胞浆游离Ca2+可逆性结合


产品性质


CAS号(CAS NO.)

112926-02-0

分子式(Formula)

C47H51N3O22

分子量(Molecular Weight)

1009.91

Ex/Em

346 nm/475 nm

溶解性(Solubility)

溶于DMSO

结构式(Structure)


运输和保存方法


冰袋运输。-20℃避光干燥保存,有效期6个月。


注意事项


为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


需要试剂准备


1) (可选)配制Pluronic F-127母液:100 mg Pluronic F-127粉末(Cat No. 60318ES60中加入0.5 mL DMSO,配制成20%(w/v)的DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30 min。溶液室温保存,不要冷藏。如果有结晶析出,可以重新加热后溶解,不影响使用。

2)Hanks•balanced salt solution

使用方法(本实验方案仅供参考,为得到实验结果,需根据具体的实验情况优化实验条件。)

1)Indo-1/AM储存液的配制

利用高质量无水DMSO溶解Indo-1/AM配制成2-5 mM的储存液,该储存液可分装于-20℃避光干燥密封保存。每次使用前需回温至室温。

【注】: 因为Indo-1/AM在水中的溶解性和稳定性较差,不可用水溶性缓冲液配制Indo-1/AM储存液。

溶解用的DMSO需要保证新鲜无水,否则将会导致AM 体水解,使荧光染料无法进入细胞,影响实验效果。

2)Indo-1/AM工作液的配制

利用合适缓冲液(如Hanks & Hepes )将Indo-1/AM稀释成1-10 μM的工作液,具体稀释方法如1 mM母液配制1 mL浓度为4 µM工作液,用1 ml 缓冲液稀释4 µL 1 mM母液即可,混匀。

【注】: 典型工作液浓度为0.1-5 μM,对于大多数细胞,我们推荐加载浓度4-5 μM,具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性,建议在取得有效结果的基础上尽量使用低探针浓度。

Indo-1/AM工作液需现配现用,避免反复冻存。

3)(可选)如果Indo-1/AM进入细胞的效果不好,可Indo-1/AM/DMSO 储存液中加入适量20% Pluronic F127溶液,终稀释至其终浓度为0.02-0.05%,Pluronic F127 可以防止 Indo-1/AM缓冲液中聚合并能帮助其进入细胞。

【注】:Pluronic F127可降低Indo-1/AM的稳定性,因此只建议在配制工作液时加入,不建议将其加入储存液长期保存。

4)取出预培养的细胞,除去培养基,使用缓冲液洗涤细胞3次。

【注】:如果使用含血清的培养基,血清中的酯酶会分解 AM 体,从而降低Indo-1/AM进入细胞的效果。另外含有酚红的培养基会使本底值略微偏高,所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。

5)Indo-1/AM工作液加入细胞,加入量以覆盖细胞为准。37培养15-60 min,然后除去Indo-1/AM工作液。

【注】:关于孵育的时间,如果*做实验不能确定,建议先孵育30 min,看荧光效果:如果细胞死亡较多,适当缩短时间;如果荧光强度太弱,适当延长时间。

6)用不含探针缓冲液洗涤细胞 3 次,以充分去除残留的Indo-1/AM工作液。然后加入缓冲液覆盖细胞。

7)37℃培养箱孵育约 20-30 min,以确保 AM 体在细胞内的*去酯化作用。

8)流式细胞仪检测细胞。

【注】: 某些细胞会将荧光探针被动运输或分泌到胞外,在一些通过阴离子泵泄漏探针的细胞内该现象尤其严重,此时需加入一些抑制剂防止该情况的发生,如加入适量的丙磺舒或磺吡酮。但需注意,抑制剂的加入量必须经过优化,过量的抑制剂也会对细胞造成不利影响。

某些细胞具有自体荧光会影响结果分析,需使用未加载探针细胞做对照,在结果分析时在同一波长下扣除自荧光。


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