Yeasen/翌圣生物 品牌
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线粒体红色荧光探针
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面议产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Polyethylenimine Linear (PEI) MW40000(rapid lysis) 线性PEI转染试剂(速溶型)MW40000 | 40816ES02 | 100 mg | 655.00 |
40816ES03 | 1 g | 1855.00 | |
40816ES08 | 5×1 g | 7255.00 |
产品描述
PEI 40000是一种分子量为40000的高电荷阳离子聚合物,非常容易结合带负电荷的核酸分子,形成复合物,并使该复合物进入细胞中。PEI 40000是一种瞬时转染试剂,细胞毒性低,转染效率高,在HEK293和CHO等细胞中基因表达效率较高。目前已经验证线性PEI转染试剂广泛适用于多种细胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela细胞等,转染效率高达80%~90%。
PEI 40000与PEI 25000转染试剂相比,具有很多优点。包括:1. PEI 40000较易溶解,可直接在水中溶解,PEI 25000需要先把水调成弱酸性助其溶解,溶解后再用NaOH把pH调至中性;2. PEI 40000操作简便,更易于使用,且比PEI 25000的转染效果好;3. PEI 25000含有4-11%的丙酰基残留,其能阻止聚合物主链与DNA结合。相较于PEI 25000,PEI 40000是*脱落的结构,因此其性能始终高效如一。
本产品为速溶型,溶解迅速,配制方便。
产品性质
中文名(Chinese Name) | 线性聚乙烯亚胺PEI 40000 |
英文名(English Name) | Polyethylenimine Linear (PEI) MW40000 |
CAS号(CAS No.) | 49533-93-7 |
分子式(Molecular formula) | (CH2CH2NH)n |
分子量(Molecular weight) | 40,000 |
外观(Appearance) | 白色至灰白色固体 |
溶解性(Solubility) | 溶于水,不溶于有机溶剂:苯,丙酮 |
结构式(Structure) |
|
运输与保存方法
运输方式:室温运输。
保存方式:粉末在室温或4 ºC保存,有效期2年。储存液 在4 ºC保存,有效期至少3个月。
注意事项
1)对大多数细胞来而言,每1 μg DNA 使用3.0 μL PEI 40000转染试剂都能获得较高转染效率。也可尝试每1 μg DNA使用 1.5~4 μL体积线性PEI 40000转染试剂进行优化。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。
3)本产品仅用于科研用途,不可用于人体
储存液配置(1 mg/mL)
1.材料
PEI 40000、Milli-Q® 水/注射用水(WFI)或类似的生物级水、1 mol/L氢氧化钠(NaOH)、一次性0.1~0.2 μm PES真空无菌过滤器、无菌HDPE或聚丙烯储存瓶。
2.配置储存液(1 mg/mL)
1)于1 L玻璃烧杯,将1g PEI 40000粉末加入900 mL Milli-Q®超纯水或其他相当级别的生物用水中,在磁子搅拌器上搅拌均匀。
2)待PEI 40000*溶解(通常不到5min);
3)边搅拌边滴加1 mol/L氢氧化钠溶液,调节pH为6.90~7.10;
注:如果pH值>7.10,请使用盐酸将pH值调至6.90~7.10;
5)将溶液转入量筒内,并加水定容到1 L。
6)用一次性0.1~0.2 µm PES真空过滤器过滤除菌,即得到1 mg/mL的储存液。
7)根据需要分装并储存在4 °C,至少3个月稳定。
转染操作流程(以6孔板为例)
1.接种细胞:为了提高转染效率,建议在转染前一天接种细胞,以转染时细胞密度在70%~80%为宜。
2.准备DNA-PEI复合物:按照以下体系配制DNA-PEI核酸-转染试剂复合物:
1)对于每孔细胞,使用100 μL无血清培养基稀释2 μg目的DNA,充分混匀成 DNA稀释液。
注:无血清稀释液建议采用Opti-MEM或ddH2O
2)立刻向100 μL的DNA稀释液中加入4 μL的PEI 40000转染试剂,旋涡10秒,充分混匀。
3)在室温下孵育10~15 min,使得形成DNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
3.转染细胞:
1)在形成复合物过程中,移除细胞生长培养基,每孔中加入2 mL新鲜预热的*培养基。
2)直接将100 μL DNA-PEI核酸-PEI复合物加入细胞中,摇动培养板,轻轻混匀。
3)37 ℃,5% CO2培养箱培养,转染后最快5 h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。
4.稳转筛选(可选)
转染24 h后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释10倍以上),37 ℃,5% CO2培养箱孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
不同细胞培养容器转染用量(仅供参考):
培养皿 | 表面积(cm2) | DNA的量(μg) | 转染试剂的量(μL) | 稀释液体积(μL) | 培养基总量 |
96孔板 | 0.3 | 0.1 | 0.1 | 10 | 100 μL |
48孔板 | 0.7 | 0.2 | 0.3 | 20 | 200 μL |
24孔板 | 1.9 | 0.5 | 1 | 50 | 500 μL |
12孔板 | 3.8 | 1 | 2 | 50 | 1mL |
6孔板 | 10 | 2 | 4 | 100 | 2 mL |
25cm2培养瓶 | 21 | 4 | 8 | 200 | 4 mL |
75cm2培养瓶 | 58 | 10 | 20 | 500 | 10 mL |
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HB220106