Yeasen/翌圣生物 品牌
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上海市所在地
线粒体红色荧光探针
¥425D-盐(D-Luciferin Potassium Salt)
面议MycAway支原体去除试剂(1000×)
面议TUNEL细胞凋亡检测试剂(tunel试剂盒)
面议TUNEL细胞凋亡检测试剂盒
面议Human Fibronectin 人纤维连接蛋白
面议Collagenase IV胶原酶IV型
面议D- 盐(D-Luciferin, Sodium Salt)
¥748FITC标记鬼笔环肽(FITC Phalloidin)
¥785TRITC Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽
¥785支原体喷雾剂(即用型)
面议1-Naphthylacetic acid 1-萘乙酸(α-萘乙酸,NAA),植物培养级别
面议Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25000)
线性PEI转染试剂 聚乙烯亚胺 MW25000
产品描述
线性PEI转染试剂 聚乙烯亚胺 MW25000是一种高电荷阳离子聚合物,非常容易结合带负电荷的核酸分子,形成复合物,并使该复合物进入细胞中。该转染试剂是一种瞬时转染试剂,细胞毒性低,转染效率高,在HEK293和CHO等细胞中基因表达效率较高。目前已经验证线性PEI转染试剂广泛适用于多种细胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela细胞等。该试剂与含血清的培养基兼容,能高效的将核酸导入细胞。
产品性质
中文名(Chinese Name) | 线性聚乙烯亚胺PEI 25000 |
英文名(English Name) | Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000 |
CAS号(CAS No.) | 9002-98-6, 26913-06-4 |
分子式(Molecular formula) | (CH2CH2NH)n |
分子量(Molecular weight) | 25,000 |
外观(Appearance) | 白色至黄色固体 |
熔点(Melting Point) | 73~75 ℃ |
溶解性(Solubility) | 溶于:热水,低pH的冷水,甲醇和乙醇。不溶于:苯和丙酮 |
结构式(Structure) |
|
运输与保存方法
运输方式:室温运输。
保存方式:粉末在室温或4 ºC保存,有效期2年。储存液-20 °C保存,有效期1年;4 °C保存,有效期2周。不可重新冻存。
注意事项
1)配置好的PEI溶液从-20 ºC拿出融化后,可放在4 ºC冰箱保存,绝不可重新冻存。
2)对大多数细胞来而言,每1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI转染试剂都能获得较高转染效率。也可尝试每1 μg DNA使用1.5~4 μL体积线性PEI转染试剂进行优化。
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套及通风橱操作。
4)本产品仅用于科研用途,不可用于人体。
储存液配置(1 mg/mL)
1.材料
PEI 25000、Milli-Q® 水/注射用水(WFI)或类似的生物级水、12 mol/L盐酸(HCl)、10 mol/L氢氧化钠(NaOH)、一次性0.1~0.2 μm PES真空无菌过滤器、无菌HDPE或聚丙烯储存瓶。
2. 配置储存液(1 mg/mL)
1)于1 L玻璃烧杯,将1g PEI 25000粉末加入900 mL Milli-Q®超纯水或其他相当级别的生物用水中,在磁子搅拌器上搅拌均匀,产生小涡。
2)边搅拌边滴加入盐酸(12 mol/L)调节pH,直至pH<2.0。
3)盖上烧杯顶部并搅拌3小时至溶解;整个过程要保持pH<2.0。
【注】:可能会存在一些小纤维状颗粒不能溶解,这是正常现象。
4)边搅拌边滴加入NaOH(10 mol/L)调节pH,直至到6.9 ~7.1。
5)将溶液转入量筒内,并加水定容到1 L。
6)用一次性0.1~0.2 µm PES真空过滤器过滤除菌,即得到1 mg/mL的储存液。
7)根据需要分装并储存在-20 °C,1年稳定。
【注】:储存液再次融化后,可置于4 °C保存,2周稳定,但绝不可重新冻存。
转染操作流程(以6孔板为例)
1.接种细胞:为了提高转染效率,建议在转染前一天接种细胞,以转染时细胞密度在 70%~80%为宜。
2.准备DNA-PEI复合物:按照以下体系配制DNA-PEI核酸-转染试剂复合物:
1)对于每孔细胞,使用100 μL无血清培养基稀释2 μg目的DNA ,充分混匀成 DNA稀释液。
【注】:无血清稀释液建议采用 Opti-MEM或ddH2O
2)立刻向100 μL的DNA稀释液中加入5 μL的PEI 25000转染试剂,旋涡10秒,充分混匀。
3)在室温下孵育10~25 min,使得形成DNA-PEI阳离子核酸转染试剂复合物。
3.转染细胞:
1)在形成复合物过程中,移除细胞生长培养基,每孔中加入2 mL新鲜预热的培养基。
2)直接将100 μL DNA-PEI核酸-PEI复合物加入细胞中,摇动培养板,轻轻混匀。
3)37 ℃,5% CO2培养箱培养,转染后最快7 h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。
4.稳转筛选(可选)
转染 24 h 后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释10倍以上),37 ℃,5% CO2培养箱孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
不同细胞培养容器转染用量(仅供参考):
培养皿 | 表面积(cm2) | DNA的量(μg) | 转染试剂的量(μL) | 稀释液体积(μL) | 培养基总量 |
96孔板 | 0.3 | 0.1 | 0.1 | 10 | 100 μL |
48孔板 | 0.7 | 0.2 | 0.3 | 20 | 200 μL |
24孔板 | 1.9 | 0.5 | 1 | 50 | 500 μL |
12孔板 | 3.8 | 1 | 2 | 50 | 1mL |
6孔板 | 10 | 2 | 4 | 100 | 2 mL |
25cm2培养瓶 | 21 | 4 | 8 | 200 | 4 mL |
75cm2培养瓶 | 58 | 10 | 20 | 500 | 10 mL |
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