支原体qPCR检测试剂盒(探针法)

40618ES05支原体qPCR检测试剂盒(探针法)

参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2023-03-15 09:00:52
669
属性:
供货周期:现货;规格:5T;货号:40618ES05;应用领域:医疗卫生,化工,生物产业;
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产品属性
供货周期
现货
规格
5T
货号
40618ES05
应用领域
医疗卫生,化工,生物产业
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

MycAway™ Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit 作为精确支原体检测试剂盒,可用于确定如细胞库、病毒种子、临床治疗用途的细胞和生物制品中是否存在支原体污染。本试剂盒采用荧光探针qPCR法技术,定性检测待测样本中支原体DNA,可覆盖100多种支原体DNA序列;具备高灵敏、高特异、高效率、安全高等优势,严格按照EP2.6.7和JPXVII支原体检测相关标

详细介绍

产品信息

 

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

MycAwayTM Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit  

支原体qPCR检测试剂盒(探针法)

40618ES25

25 T

3155

40618ES60

100 T

10355

 

产品描述

 

MycAwayTM Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit 作为精确支原体检测试剂盒,可用于确定如细胞库、病毒种子、临床治疗用途的细胞和生物制品中是否存在支原体污染。本试剂盒采用荧光探针qPCR法技术,定性检测待测样本中支原体DNA,可覆盖100多种支原体DNA序列;具备高灵敏、高特异、高效率、安全高等优势,严格按照EP2.6.7和JPXVII支原体检测相关标准要求进行验证。

本试剂盒包含内部质控(IC),可用来判断待检样本中是否包含对扩增反应存在抑制的因素,从而达到防止假阴性结果的产生;内部质控(IC)也可在样本提取阶段加入,以评估提取效果。本试剂盒与支原体DNA提取纯化试剂盒配套使用,高效提取样本中的支原体DNA,检测限可达到10 CFU/mL,最高灵敏度可达1 CFU/mL。

 

产品组分

 

编号

组分

产品编号/规格

40618ES25 (25 T)

40618ES60 (100 T)

40618-A

4×MyqPCR Reaction Buffer

250 μL

1 mL

40618-B

MyPrimer&Probe MIX

25 μL

100 μL

40618-C

内部质控(IC)

25 μL

100 μL

40618-D

阳性质控(PC)

500 μL

2 mL

【注】:阳性质控(PC)浓度为1000copies/µL。

 

输储存方法

 

干冰运输。-20℃保存,有效期一年。

 

注意事项

 

1)使用本试剂前请仔细阅读本说明书,实验应规范操作,包括样本处理、反应体系的配制及加样。

2)加样和配液步骤都尽量在冰上操作。

3)每个组分在使用前都应震荡混匀,低速离心。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5)本产品仅作科研用途。

 

适用机型

 

PRISM®7500Real-Time PCR SystemQuantStudio™5(ABI);CFX96(Bio-Rad)

 

实验设计

 

一、待测样本DNA提取

建议使用QIAGEN公司的QIAamp DNA Mini Kit提取样本DNA。

二、qPCR反应体系的准备

1)根据所要检测样本的数量,计算所需反应孔数,一般做2个重复孔。

反应孔数=(1个阳性质控PC+1个无模板对照NTC+N个待测样本)×2

2)根据表1反应体系,将所需试剂放冰上融化。

3)根据反应孔数计算所需要的qPCR Mix的量。

Mix=(反应孔数+2)*(10+1+1+8)(包含加样损失)

1 反应体系(以40 μL为例)

组分

单孔体积(μL)

终浓度

4× MyqPCR Reaction Buffer (40618-A)

10

 

待测样本DNA/阳性质控

20


MyPrimer&Probe MIX (40618-B)

1

0.4 μM

IC (40618-C)

1/0*


超纯水

Up to 40


Total

40


【注】:1)为保证实验的稳定性,40618-A、40618-B组分需储存于-20℃。

2)为减少反复冻融次数和避免污染,建议初次使用时将40618-C、40618-D分装储存于-80℃。

3)qPCR Mix配制过程不加待测样本DNA与阳性质控。

4)1/0代表NTC反应孔中是否添加IC,使用试剂盒时建议加上IC,可以更好的确认体系是否配置正确。若不加,结果判断请参照结果分析提示。

三、加样

1)充分震荡混匀qPCR Mix,低速离心,将管盖残留液体收集至管底。

2)向每孔反应管中分装20μL qPCR Mix。

3)向已分装过qPCR Mix的反应管中加入样品,示例如下:

2 加样示例

待测样本DNA

20 μL qPCR Mix+20 μL 待测样本DNA

NTC对照

20 μL qPCR Mix+20 μL DNA Elution Buffer (或者ddH2O)

阳性质控(PC)

20 μL qPCR Mix +20 μL 阳性质控

【注】:此时每个反应孔的体积为40μL

4)盖上反应管盖子或者贴上光学膜,为避免影响荧光信号读取,请注意不要在管盖或者膜上做标记,或者用刮板反复摩擦。

5)反应管短时低速离心,将管壁液体收集至管底;充分震荡混匀后,再短时低速离心,将管盖和管壁的残留液体收集至底,如有气泡,需将气泡排尽。

 

qPCR程序参数设置

 

1、创建目的通道探针:

创建目的通道的FAM探针,选择报告荧光基团为FAM,猝灭荧光基团为none;

创建IC 通道的VIC探针,选择报告荧光基团为VIC,猝灭荧光基团为none;

选择检测参比荧光为ROX(可选择,试剂盒中不含)。

2、标准扩增程序:


反应阶段

温度

时间

循环数

1

预变性

95℃

5 min

1

2

扩增反应

95℃

15 sec

45

62℃*

30 sec

【注】:* 荧光信号采集。

 

结果分析

 

1、PC、NTC结果判断:

质控样本

FAM 信号

VIC 信号

PC

Ct<40 ,且有明显的扩增曲线。

Ct<40 ,且有明显的扩增曲线。

NTC

Ct≧40 ,或无明显的起峰。

Mix 中添加内参IC ,Ct<40 ,且有明显的扩增曲线。

Ct≧40 ,或无明显的起峰。

Mix 未添加内参IC ,Ct≧40 ,或无明显的起峰。

2、待测样本检测结果判定:

FAM 信号

VIC 信号

结果判断

Ct<40 ,且有明显的扩增曲线

Ct<40 ,且有明显的扩增曲线

阳性

Ct≧40 ,或无明显的起峰

有抑制

Ct≧40 ,或无明显的起峰

Ct<40 ,且有明显的扩增曲线

阴性

Ct≧40 ,或无明显的起峰

有抑制

【注】:*VIC信号如果有抑制,需重测或对样本进行合适处理消除抑制因子

 

HB220112


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