Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
线粒体红色荧光探针
¥425D-盐(D-Luciferin Potassium Salt)
面议TUNEL细胞凋亡检测试剂(tunel试剂盒)
面议TUNEL细胞凋亡检测试剂盒
面议Human Fibronectin 人纤维连接蛋白
面议Collagenase IV胶原酶IV型
面议D- 盐(D-Luciferin, Sodium Salt)
¥748FITC标记鬼笔环肽(FITC Phalloidin)
¥785TRITC Phalloidin 罗丹明标记鬼笔环肽
¥785Polybrene 聚凝胺(10 mg/mL)
面议1-Naphthylacetic acid 1-萘乙酸(α-萘乙酸,NAA),植物培养级别
面议胎牛血清(南美特级) Fetal Bovine Serum
面议产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
MycAwayTM Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit 支原体qPCR检测试剂盒(探针法) | 40618ES25 | 25 T | 3155 |
40618ES60 | 100 T | 10355 |
产品描述
MycAwayTM Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit 作为精确支原体检测试剂盒,可用于确定如细胞库、病毒种子、临床治疗用途的细胞和生物制品中是否存在支原体污染。本试剂盒采用荧光探针qPCR法技术,定性检测待测样本中支原体DNA,可覆盖100多种支原体DNA序列;具备高灵敏、高特异、高效率、安全高等优势,严格按照EP2.6.7和JPXVII支原体检测相关标准要求进行验证。
本试剂盒包含内部质控(IC),可用来判断待检样本中是否包含对扩增反应存在抑制的因素,从而达到防止假阴性结果的产生;内部质控(IC)也可在样本提取阶段加入,以评估提取效果。本试剂盒与支原体DNA提取纯化试剂盒配套使用,高效提取样本中的支原体DNA,检测限可达到10 CFU/mL,最高灵敏度可达1 CFU/mL。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
40618ES25 (25 T) | 40618ES60 (100 T) | ||
40618-A | 4×MyqPCR Reaction Buffer | 250 μL | 1 mL |
40618-B | MyPrimer&Probe MIX | 25 μL | 100 μL |
40618-C | 内部质控(IC) | 25 μL | 100 μL |
40618-D | 阳性质控(PC) | 500 μL | 2 mL |
【注】:阳性质控(PC)浓度为1000copies/µL。
运输储存方法
干冰运输。-20℃保存,有效期一年。
注意事项
1)使用本试剂前请仔细阅读本说明书,实验应规范操作,包括样本处理、反应体系的配制及加样。
2)加样和配液步骤都尽量在冰上操作。
3)每个组分在使用前都应震荡混匀,低速离心。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
5)本产品仅作科研用途。
适用机型
PRISM®7500Real-Time PCR System、QuantStudio™5(ABI);CFX96(Bio-Rad)
实验设计
一、待测样本DNA提取
建议使用QIAGEN公司的QIAamp DNA Mini Kit提取样本DNA。
二、qPCR反应体系的准备
1)根据所要检测样本的数量,计算所需反应孔数,一般做2个重复孔。
反应孔数=(1个阳性质控PC+1个无模板对照NTC+N个待测样本)×2
2)根据表1反应体系,将所需试剂放冰上融化。
3)根据反应孔数计算所需要的qPCR Mix的量。
Mix=(反应孔数+2)*(10+1+1+8)(包含加样损失)
表1 反应体系(以40 μL为例)
组分 | 单孔体积(μL) | 终浓度 |
4× MyqPCR Reaction Buffer (40618-A) | 10 | 1× |
待测样本DNA/阳性质控 | 20 | |
MyPrimer&Probe MIX (40618-B) | 1 | 0.4 μM |
IC (40618-C) | 1/0* | |
超纯水 | Up to 40 | |
Total | 40 |
【注】:1)为保证实验的稳定性,40618-A、40618-B组分需储存于-20℃。
2)为减少反复冻融次数和避免污染,建议初次使用时将40618-C、40618-D分装储存于-80℃。
3)qPCR Mix配制过程不加待测样本DNA与阳性质控。
4)1/0代表NTC反应孔中是否添加IC,使用试剂盒时建议加上IC,可以更好的确认体系是否配置正确。若不加,结果判断请参照结果分析提示。
三、加样
1)充分震荡混匀qPCR Mix,低速离心,将管盖残留液体收集至管底。
2)向每孔反应管中分装20μL qPCR Mix。
3)向已分装过qPCR Mix的反应管中加入样品,示例如下:
表2 加样示例
待测样本DNA | 20 μL qPCR Mix+20 μL 待测样本DNA |
NTC对照 | 20 μL qPCR Mix+20 μL DNA Elution Buffer (或者ddH2O) |
阳性质控(PC) | 20 μL qPCR Mix +20 μL 阳性质控 |
【注】:此时每个反应孔的体积为40μL
4)盖上反应管盖子或者贴上光学膜,为避免影响荧光信号读取,请注意不要在管盖或者膜上做标记,或者用刮板反复摩擦。
5)反应管短时低速离心,将管壁液体收集至管底;充分震荡混匀后,再短时低速离心,将管盖和管壁的残留液体收集至底,如有气泡,需将气泡排尽。
qPCR程序参数设置
1、创建目的通道探针:
创建目的通道的FAM探针,选择报告荧光基团为FAM,猝灭荧光基团为none;
创建IC 通道的VIC探针,选择报告荧光基团为VIC,猝灭荧光基团为none;
选择检测参比荧光为ROX(可选择,试剂盒中不含)。
2、标准扩增程序:
反应阶段 | 温度 | 时间 | 循环数 | |
1 | 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |
2 | 扩增反应 | 95℃ | 15 sec | 45 |
62℃* | 30 sec |
【注】:* 荧光信号采集。
结果分析
1、PC、NTC结果判断:
质控样本 | FAM 信号 | VIC 信号 |
PC | Ct<40 ,且有明显的扩增曲线。 | Ct<40 ,且有明显的扩增曲线。 |
NTC | Ct≧40 ,或无明显的起峰。 | Mix 中添加内参IC ,Ct<40 ,且有明显的扩增曲线。 |
Ct≧40 ,或无明显的起峰。 | Mix 未添加内参IC ,Ct≧40 ,或无明显的起峰。 |
2、待测样本检测结果判定:
FAM 信号 | VIC 信号 | 结果判断 |
Ct<40 ,且有明显的扩增曲线 | Ct<40 ,且有明显的扩增曲线 | 阳性 |
Ct≧40 ,或无明显的起峰 | 有抑制 | |
Ct≧40 ,或无明显的起峰 | Ct<40 ,且有明显的扩增曲线 | 阴性 |
Ct≧40 ,或无明显的起峰 | 有抑制 |
【注】:*VIC信号如果有抑制,需重测或对样本进行合适处理消除抑制因子
HB220112