Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
产品描述
Anti-GFP MagBeads(Anti-GFP免疫磁珠)是一种聚合物磁性微球,由高质量的鼠源IgG单克隆抗体与carboxyl magnetic beads通过供价偶联制备,本产品具有快速的磁响应性,超顺磁性、良好的分散性、粒径均一、极低的非特异结合和丰富的结合位点等特点,可用于带有GFP标签的蛋白免疫沉淀(IP)。
产品性质
配体 | Anti-GFP Antibody |
粒径 | 200 nm |
结合能力 | >0.6 mg蛋白/mL 磁珠 |
磁珠体积 | 10 mg/mL |
储存缓冲液 | ddH2O |
运输和保存方法
冰袋运输。2-8℃储存。避免冻存!有效期1年。
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅作科研用途!
使用方法
1样品准备
样品可以是细菌发酵液或者细胞裂解液, 样品中不能含有颗粒不溶物,可以用0.22 μm滤膜过滤或10,000×g离心15 min。
2 磁珠预处理
2.1 用移液器轻柔吹打Anti-GFP免疫磁珠,使其充分混悬,取 25~50 µL 磁珠悬液置于1.5 mL离心管中。
2.2 加入500 µL IP Lysis/Wash Buffer并轻轻移液器混合,用移液器轻柔吹打重悬Anti-Flag免疫磁珠,接着在磁力架上静置1 min后,吸弃上清。
2.3 重复步骤 2.2 两次。
3样品的结合
3.1 在预处理后的磁珠中加入蛋白样品,置于翻转混合仪上孵育(常温2 h,4 ℃过夜);
3.2 将上述混合液置于磁力架上静置1 min,然后把上清液转移到新的离心管中备用(上清液可用于检测Flag标签蛋白是否存在残留),原离心管中剩余的即为 蛋白-磁珠复合物;
注意:结合过程中,磁珠可能会出现聚团或呈片状,属于正常现象,不会影响实验结果。
4洗涤
4.1 向步骤3.2所得的蛋白-磁珠复合物中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer ,用移液器轻柔吹打重悬,接着在磁力架上静置 1 min 后, 吸弃上清;
4.2 重复步骤4.1两次,直至洗涤后的上清液OD280小于0.05为止;
注意:如上清液的OD280仍大于0.05,则适当增加洗涤次数。
5蛋白洗脱
5.1 酸性洗脱(0.1 M Gly-HCl,pH 3.0)
1)加入100 μL 0.1 M Gly-HCl,pH 3.0,室温孵育5-10 min(慢慢摇晃)。
2)分离磁珠上的磁珠并保存含有目标抗原的上清液。
3)中和低pH,每100 μL洗脱液加入20 μL中和缓冲液(1M Tris pH8.5)。最后的溶液可以用作样品用于变性 SDS-PAGE。
5.2 用SDS-PAGE上样缓冲液洗脱
如需直接检测目的蛋白,则在上述洗涤过的蛋白-磁珠复合物中加入100 μL 1×SDS-PAGE上样缓冲液,煮沸 5 min,冷却至室温并在磁力架上静置 1 min 后,取上清进行 SDS-PAGE 检测。