SOLARBIO/索莱宝 品牌
生产厂家厂商性质
北京市所在地
脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒(微量法)说明书
货号:BC0255
规格: 100T/96S
脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒(微量法)产品简介:
HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等,因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。
样品经水解产生游离的HYP,进一补被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值,可计算HYP含量。
产品内容:
组织提取液:6mol/L盐酸,自备。浓盐酸:H2O(V/V)= 1:1,室温保存;
细胞提取液:液体100mL×1 瓶,4 ℃保存;
试剂一:液体10mL×1 瓶,4 ℃避光保存;
试剂二:液体10mL×1 瓶,4 ℃避光保存。
脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒(微量法)操作步骤:
一、羟脯氨酸提取:
1. 组织:取约0.2g 样品于玻璃管,加入2mL的组提取液,置于110℃烘箱,水解612小时,16000rpm,25℃,离心20min,用提取液定容2mL,取上清待测。
2. 细胞:取约500 万个细胞,加入1mL 的细胞提取液,于高压消毒器中15 磅保持30min,自然降压后待测。
二、测定操作:
| 对照管 | 测定管 |
样本(uL) |
| 60 |
试剂一(uL) | 60 | 60 |
混匀,室温静置20min | ||
试剂二(uL) | 60 | 60 |
H2O(uL) | 180 | 120 |
混匀,60℃,20min,取出后室温静置15 min,测定A560。(A560=A测定-A对照) |
羟脯氨酸含量计算:
用微量比色皿测定的计算公式:
标准曲线:y=64.875x+ 0.0251,R2=0.9991
(1)按组织计算
HYP含量(mg/g) =(A560-0.0251)÷64.875×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
=0.154×(A560-0.0251)÷W
(3)按细胞计算:
HYP含量(mg/104cell)= (A560-0.0251)÷64.875×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)
=0.077×(A560-0.0251)÷细胞数量(万个)
V反总:反应体系总体积,0.3mL; V样:反应中样本体积,0.06mL;V样总:加入提取液体积,mL; W:样本质量,g。
用96孔板测定的计算公式如下:
标准曲线:y=32.4375x+ 0.0251,R2=0.9991
(1)按组织计算
HYP含量(mg/g) =(A560-0.0251)÷32.4375×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
=0.308×(A560-0.0251)÷W
(3)按细胞计算:
HYP含量(mg/104cell)= (A560-0.0251)÷32.4375×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)
=0.154×(A560-0.0251)÷细胞数量(万个)
V反总:反应体系总体积,0.3mL; V样:反应中样本体积,0.06mL;V样总:加入提取液体积,mL; W:样本质量,g。
注意事项:
1、OD值大于0.8,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、试剂有一定的毒性,请操作时做好防护措施,防止吸入或与皮肤接触。