土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒 微量法

土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒说明书
微量法

产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼
英文名称：Soil neutral protease activity detection kit
产品商标：solarbio
注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC0275
规格：100T/48S
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            
参考价格：1380
库存状态：现货
关键词：土壤中性蛋白酶|土壤中性蛋白酶活性检测|蛋白酶活性检测
产品内容：
试剂一：液体20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂一，沸水浴搅拌溶解后待用；
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入10mL 蒸馏水充分溶解待用；
试剂四：液体20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：液体5mL×1 瓶，4℃保存；
标准品：液体1mL×1 支，0.2 μmol/mL 酪氨酸溶液，4℃保存。

产品说明：
土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。土壤中性蛋白酶在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。中性条件下，土壤中性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝，在680nm 有特征吸收峰。

实验中所需仪器及设备：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量比色皿/96孔板、甲苯、蒸馏水、50目筛（或更小）。

样品处理：
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50 目筛。

操作步驟：
1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长680nm，蒸馏水调零。
2、样本测定：
试剂名称         测定管               对照管         标准管              空白管
风干土样（g）      0.05                 0.05            -                   -
试剂一（μL）       50                   50             -                   -
试剂二（μL）       100                                 -                   -
                  混匀后，37℃反应24h，期间振荡5-6 次，使土样与反应液充分接触。
试剂三（μL）       100                  100            -                   -
试剂二（μL）        -                   100            -                   -
                           混匀，10000rpm 室温离心10min，取上清液
上清液（μL）         44                   44            -                   -
标准液（μL）         -                    -             44                  -
蒸馏水（μL）         -                    -             -                  44
试剂四（μL）        130                  130            130               130
试剂五（μL）         26                   26             26                26

混匀，40℃水浴10min，10000rpm 室温离心10min，取上清液于680nm 下读取各管吸光值A，分别记为A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管，计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

注意：标准管、空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

土壤中性蛋白酶活性计算：
单位定义：每天每g土样中产生1μmol 酪氨酸为一个土壤中性蛋白酶活力单位。土壤中性蛋白酶(U/g)=C标准×ΔA测定÷ΔA标准×V 反总÷W÷T= 0.05×ΔA测定÷ΔA标准÷W。
C 标准管：标准管浓度，0.2 μmol/mL；
V 反总：反应体系总体积，0.25mL；
T：反应时间，1d；
W：样本质量，g。

注意事项：
1、当吸光值大于1.5时，建议将上清液稀释后进行测定，计算时注意乘以稀释倍数。
 

相关文献： 

《Evaluating the effects of phytoremediation with biochar additions on soil nitrogen mineralization enzymes and fungi》 作者:Manyun Zhang,Jun Wang, Shahla Hosseini Bai, Ying Teng,Zhihong Xu 期刊:Environmental Science and Pollution Research 影响因子:2.914 PMID:29860689

土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒 微量法