过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书（分光光度法）

货号：BC0090

规格：50管/48样

产品简介：

POD广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒产品内容：

提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体×2瓶，4℃保存；用时每瓶加入5mL试剂一，现配现用；

试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。

操作步骤：

一、粗酶液提取：   

1、细菌、细胞或组织样品的制备   

收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1ml提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200w，超声3秒，间隔10秒。重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

二、POD测定操作表 

测定前将试剂一、二和三 37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）放置10min。在1mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，加入样本后立即混匀并计时，记录470nm下30s时的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1

注意：如果ΔA小于0.005，可将反应时间延长到5min。如果ΔA大于0.5，可将样本提取液稀释后测定，计算公式中乘以相应的稀释倍数

POD活性计算：   

1、血清（浆）POD活力的计算:

单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每分钟使A470变化0.01定义为一个酶活力单位。

POD（U/L）＝反应总体积（1070ul）÷样本体积（15ul）÷0.01×ΔA=7133×ΔA

2、组织POD活力计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟使A470变化0.01定义为一个酶活力单位。

POD（U/mg prot）＝反应总体积（1070ul）÷样本体积（15ul）÷0.01×ΔA÷样本蛋白浓度(mg/ml)=7133×ΔA÷样本蛋白浓度(mg/ml)

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟使A470变化0.01定义为一个酶活力单位。

POD（U/g mass）＝反应总体积（1070ul）÷样本体积（15ul）÷0.01×ΔA÷样本质量=7133×ΔA÷样本质量

3、按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟使A470变化0.01定义为一个酶活力单位。

POD（U/10⁴ cell）＝反应总体积（1070ul）÷样本体积（15ul）÷0.01×ΔA÷500（10⁴ cell /mL）=14.27×ΔA