商品属性：

产品名称：水溶性氯化物生化检测试剂盒（滴定法）

规格：50管/48样  

货号 : EY-01S1362

测试方法:滴定法　　　

分类：信号系列

商品详情：

测定意义

氯是植物第16个必需营养元素。作为微量营养元素，其在植物体内主要以离子形态参与光合作用 、抑制植物病害 、调节气孔开闭、维护细胞渗透压和保持体内电荷平衡等生理活动。它的过量与不足均会导致植物生长不良。

测定原理

在中性至弱碱性范围内，以铬酸钾为指示剂，用滴定氯化物时，由于氯化银的溶解度小于铬酸银的溶解度，氯离子首先被沉淀出来后，然后铬酸盐以铬酸银的形式被沉淀，产生砖红色。

需自备的仪器和用品

天平、研钵、常温离心机、移液器、蒸馏水。

粗酶液提取：

1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；16000g， 4℃离心20min，取上清液置冰上待测。

3、血清等液体：直接测定。

ADH测定操作：

1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂三在25℃水浴中保温30 min。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL样本上清液、800μL试剂三和100μL试剂四，迅速混匀后于340nm测定吸光值变化，分别记录15s和75s时吸光值，分别记为A1和A2。△A测定管=A1-A2。

测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、将试剂二在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。

3、操作表：

将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中，混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和反应1min后的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。

注意：若A1-A2大于0.5，需将样本用提取液稀释，使A1-A2小于0.5，可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。

NAD-MDH活力单位的计算：

1、血清（浆）NAD-MDH活力的计算

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=6430×ΔA

2、组织、细菌或细胞中NAD-MDH活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W× V样÷V样总）÷T =6430×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（2000×V样÷V样总）÷T=3.215×ΔA

V反总：反应体系总体积，8×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；2000：细胞或细菌总数，2000万。

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