产品描述
　　PikoOrange Protein Quantitation Kit是一个高度敏感的基于荧光技术定量纯化蛋白质的试剂盒，其检测蛋白浓度范围为0.1~10 μg/ml。比起传统定量方法如BCA、Bradford或Lowry蛋白定量分析，PikoOrange蛋白定量试剂盒敏感性更佳，此外，与NanoOrange蛋白质定量测定技术相比具有更好的的线性和重现性。PikoOrange蛋白定量试剂盒可显示不同蛋白质之间的小变异性，且荧光信号稳定长达16 h；其受测样本不论为纯化蛋白或抗体皆适用。需特别注意的是，PikoOrange对盐类、缓冲液、去垢剂或是其他化学物质都有不同程度的耐受性（表1）。
产品信息

产品组分

运输与保存
常温运输。组分A常温保存；组分B常温避光保存；组分C  4℃ 保存。有效期36个月。
【注】：如果缓冲液出现沉淀，可加热到37℃并漩涡溶解。
使用方法

1. 制备1x PikoOrange缓冲液: 1:10 稀释10x缓冲液在dH₂O。例如，添加1 mL10x 缓冲液至9 mL dH₂O。 PikoOrange缓冲液可以储存在室温下。

2. 使用前准备PikoOrange工作液：将200xPikoOrange染料按1:200用1x PikoOrange缓冲液稀释。例如，添加25 μL 500x PikoOrange染料至5 mL 1x PikoOrange缓冲液。
   注意：您将需要大约3 mL工作液制作标准曲线（见表2)以及每孔检测样品250 μL工作液。

3. 准备未知样本：10 μL 样本添加 250 μL PikoOrange工作液。
   注意：您可能需要稀释未知样本以得到不同浓度的样本。样品稀释可能会减少干扰物质的影响。

4. 准备一个蛋白质标准曲线所需的BSA浓度，如表2所示。

5. 样本和标准蛋白加热至90~ 95℃ 10分钟，此过程需避光操作。

6. 取出样本室温避光放置20 min冷却。短时间离心收集全部样本。

7. 每个标准样品或未知样品取200 μL转移到96孔酶标板，荧光酶标仪读数。激发/发射波长为480/598 nm。
   【注】：样品可以被转移到荧光试管使用荧光仪测量。如果需要超过200 μL体积测量，等比例放大配置方案。
   
   表1：PikoOrange对不同化学物质的耐受性

表2：准备BSA样品制作标准曲线

	BSA体积		工作液体积	BSA 终浓度（μg/mL）
A	5 μL BSA std (2 mg/mL)		995 μL	10
B	250 μL solution A		250 μL	5
C	250 μL solution B		250 μL	2.5
D	200 μL solution C		300 μL	1
E	250 μL solution D		250 μL	0.5
F	250 μL solution E		250 μL	0.25
G	100 μL solution F		150 μL	0.1
H	0 μL solution G		250 μL	0
图1：PikoOrange比NanoOrange有更好的线性和重现性

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