EHA105 农杆菌感受态细胞10×100μL*规格及成分：

EHA105 农杆菌感受态细胞10×100μL*产品及特点：

本产品是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌 DH10 Bac 感受态细胞，适用于昆虫杆状病毒 Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株，用于产生重组 Bacmid。使用 pUC19 质粒检测，本产品转化效率可达 107CFU/μg。 DH10Bac 细胞包含亲本 Bacmid bMON14272 和辅助质粒 pMON7124。亲本 Bacmid 包含一个 mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和 lac Zα-互补因子。辅助质粒包含 tns ABCD 区域，该区域提供了 mini-Tn7 从供体质粒插入亲本 Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如 pFastBac 系列质粒（pFastBac1，pFastBacDual 等）含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重组臂，Tn7R 和 Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位点和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信号。当含有靶基因 pFastBac 的重组质粒转化到 DH10Bac 细胞后，发生重组后就可产生重组 Bacmid，提取纯化重组 Bacmid 转染昆虫细胞 Sf9 或 Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外，DH10Bac 细胞中的 The φ80dlacZDM15 基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象，用于重组 bacmid 的蓝白斑筛选。菌株基因型为：F- mcrA Δ(mrrhsdRMSmcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG/pMON14272/pMON7124 。
EHA105 农杆菌感受态细胞10×100μL*使用方法：
1. 制备含有如下抗生素的 LB 固体平板：50 μ g/mL Kanamycin，7 μ g/mL gentamicin，10 μg/mL tetracycline，100 μg/mL X-gal，40 μg/mL IPTG。
2. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100 μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以 100 μL 感受态细胞为例。
3. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入 1-10 ng 重组质粒，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。
4. 42℃热击 90 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。
5. 每个离心管中加入 900 μL 无菌的 SOC（不含抗生素），混匀后置于 37℃ 摇床， 200rpm 振荡培养 4 小时。
6. 用 SOC 培养基进行 10 倍梯度稀释，如分成 3 个稀释梯度 10-1,10-2,10-3。
7. 取 100 μL 的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体*吸收后，倒置平板， 37℃培养 24-48 小时。 8. 保留剩余的菌液保存于 4℃，视平板上菌落生长情况决定去留。

球毛壳 Chaetomium globosum
宇佐美曲霉 Aspergillus usamii
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)5×106cells/瓶×2
杆菌属 Lactobacillus sp.
苜蓿中华根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
TBS500ml国产
酸球菌亚种 Lactococcus lactis subsp. lactis
毛柄金钱菌(金针菇) Flammulina velutipes
小鼠子宫平滑肌细胞*培养基100mL
人椎间盘髓核细胞*培养基100mLShorr（绍氏）染色法特殊细胞染色试剂盒
Unna Pappenheim甲基绿派洛宁法核酸染色试剂盒
Benitz-Fischer明胶作用法乳酸脱氢酶显色试剂盒
Mann涅格里体染色法病毒包涵体染色试剂盒
Anticoagulant ACD Solution（抗凝剂ACD)
CAPS Buffer,0.5M,pH9.0
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline（D-PBS，杜氏PBS缓冲液，含钙镁），1×
HCl Solution（盐酸溶液）,1M
Lactate Buffered Ringer’s Solution（乳酸盐林格液）
MOPS Buffer,1.0M,pH7.0
Phosphate Buffer，0.2M, pH9.0
Potassium Phosphate Solution，0.5M, pH7.0
Saponine Permeating Solution in PBS（皂素PBS渗透液）,5X
Sucrose Gelatin Veronal Buffer (SGVB)
Tricine Buffered Saline,5X,pH7.4
Yeast Lysis Buffer (for mini prep)
8A
E2-Orange（E2Orange）
hmMiCy1
L3605
lac operator
M13Gori1
冻胶假丝酵母 Candida gelida
EHA105 农杆菌感受态细胞10×100μL*醋酸钙不动杆菌 Acinetobacter calcoaceticus
EBTr (NBL-4) (牛胚气管细胞)5×106cells/瓶×2
酒假丝酵母 Candida kefyr
豌豆根瘤菌 Rhizobium leguminosarum
MLA144臂猿淋巴瘤细胞英文名称：MLA144gersion
地衣芽孢杆菌 Bacillus licheniformis