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【友情提示】:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失,请仔细阅读购买说明!
产品名称:谷氨酸脱羧酶(GAD)可见分光光度法测试盒
规格 : 50管/24样
测试方法: 可见分光光度法
货号:GOY-01S6520
分类:氨基酸代谢系列
商品介绍:
谷氨酸脱羧酶是将谷氨酸转化成抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)的限速酶,γ-氨基丁酸是中枢神经系统中有效的抑制性神经递质,具有降血压、增进脑活力、营养神经细胞、保持神经安定、促进生长激素分泌和保肝利肾等作用,目前在医药和保健食品中已有广泛的应用。
测定原理:
GAD催化谷氨酸产生GABA,利用berthelot反应测定GABA含量,从而测定GAD活性。
需自备的仪器和用品:
分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液一:液体50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入40mL试剂四充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;
试剂二:液体18μL×1瓶,4℃保存;临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4℃保存;
试剂四:液体50mL×1瓶, 4℃保存;
测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、 将试剂一、二、三37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。
3、 加样表:
样本的前处理
①总FBP酶提取:建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定。
②胞浆和叶绿体FBP酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一),冰浴匀浆后于4℃,200g离心5min,弃沉淀,取上清在4℃,8000g离心10min,取上清用于测定胞浆FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃,8000g离心10min,取上清测定叶绿体中FBP酶活性。
建议测定总FBP酶活性,按照步骤①提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的FBP,则按照步骤②提取粗酶液。
20号染色体开放阅读框128抗体 b5抗体
P450ⅡE1抗体 b5还原酶3抗体
CD8/CD8-β抗体 b245轻链抗体
细胞周期蛋白依赖性激酶CABLES2抗体 细胞球蛋白抗体
B-淋巴细胞趋化因子抗体 细胞迁移诱导因子5抗体
大鼠凝血因子Ⅹ(F10)elisa检测试剂盒
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谷氨酸脱羧酶(GAD)可见分光光度法测试盒即用型封堵液 (Nylon 专用 )50mL 即用型蓝白 T 载体 E 型 ( 无启动子,无 MCS)20 次
硝酸纤维素膜,13×20cm1张 即用型蓝白 T 载体 D 型 ( 无启动子,有 MCS)20 次
硝酸纤维素膜,13×20cm1张 即用型蓝白 T 载体 C 型 (T7-T3,无 MCS)20 次
尼龙膜,13×20cm1张 即用型蓝白 T 载体 B 型 (T7-T3, 有 MCS)20 次
分子杂交炉1台 即用型蓝白 T 载体 A 型 (T7-SP6,有 MCS)20 次
FBP活性计算:
(1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。
FBP(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反总:反应体系总体积,1×10-3 L;ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.1 mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。