【友情提示】：本产品仅供科研研究使用，不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失，请仔细阅读购买说明！

产品名称：辅酶ⅠNAD(H)含量可见分光光度法测试盒

规格 : 50管/24样

测试方法:可见分光光度法

货号：GOY-01S6322

分类：辅酶Ⅰ系列

商品介绍：

测定意义
辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循环（TCA）的主要氢受体，生成的NADH经呼吸电子链（ETC）传递把电子交给氧，在合成ATP的同时，形成大量的ROS，同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外，NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH，NADH通过PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT）为甲瓒，在570nm下检测吸光值；而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH，进一步采用MTT还原法检测。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液一：液体50mL×1瓶，4℃保存。

提取液二：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入40mL试剂四充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；

试剂二：液体18μL×1瓶，4℃保存；临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；

试剂四：液体50mL×1瓶， 4℃保存；

测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、 将试剂一、二、三37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热10分钟。

3、 加样表：

样本的前处理

①总FBP酶提取：建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定。

②胞浆和叶绿体FBP酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5～10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL提取液一），冰浴匀浆后于4℃，200g离心5min，弃沉淀，取上清在4℃，8000g离心10min，取上清用于测定胞浆FBP酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g离心10min，取上清测定叶绿体中FBP酶活性。

建议测定总FBP酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的FBP，则按照步骤②提取粗酶液。

干扰素诱导T-细胞α亚族趋化剂(ITαC)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for Interferon Inducible T-Cell Alpha Chemoattractant (ITaC)    96T    Rattus norvegicus (Rat)    

趋化因子C-基元配体2(XCL2)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for Chemokine C-Motif Ligand 2 (XCL2)    96T    Homo sapiens (Human)    

VEGF共调节趋化因子1(VCC1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for VEGF Co Regulated Chemokine 1 (VCC1)    96T    Homo sapiens (Human)    

VEGF共调节趋化因子1(VCC1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for VEGF Co Regulated Chemokine 1 (VCC1)    96T    Mus musculus (Mouse)    

VEGF共调节趋化因子1(VCC1)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for VEGF Co Regulated Chemokine 1 (VCC1)    96T    Rattus norvegicus (Rat)    

白细胞介素24(IL24)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 24 (IL24)    96T    Homo sapiens (Human)    

白细胞介素24(IL24)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 24 (IL24)    96T    Mus musculus (Mouse)    

白细胞介素24(IL24)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 24 (IL24)    96T    Rattus norvegicus (Rat)    

白介素20(IL20)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 20 (IL20)    96T    Homo sapiens (Human)    

白介素29(IL29)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 29 (IL29)    96T    Homo sapiens (Human)    

白介素22(IL22)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 22 (IL22)    96T    Homo sapiens (Human)    

白介素22(IL22)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for Interleukin 22 (IL22)    96T    Mus musculus (Mouse)    

生长分化因子15(GDF15)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 15 (GDF15)    96T    Homo sapiens (Human)    

生长分化因子15(GDF15)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 15 (GDF15)    96T    Mus musculus (Mouse)    

生长分化因子15(GDF15)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for Growth Differentiation Factor 15 (GDF15)    96T    Rattus norvegicus (Rat)    

ATP结合盒转运蛋白B10(ABCB10)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)    CLIA Kit for ATP Binding Cassette Transporter B10 (ABCB10)    96T    Homo sapiens (Human)    

WNK4(Ser/Thr-protein kinase WNK4; protein kinase with no lysine 4; protein kinase, lysine –dficient 4)  一种新的辅酶ⅠNAD(H)含量可见分光光度法测试盒丝氨酸/苏氨酸激酶家族成员的基因WNK4（多肽抗原）     0.5mg    

ZNF300 (zinc finger protein ZNF300)- middle  锌指蛋白300(抗原)     0.5ml    

ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- N-terminal (1a)  锌指脂蛋白-1a(抗原)     0.5mg    

ZNF268 (zinc finger protein ZNF268)- middle (1b)  锌指脂蛋白-1b(抗原）     0.5mg    

FBP活性计算：

（1）按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位的定义：每g组织每分钟生成1 nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

FBP（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.5×ΔA÷W

V反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。