L半乳糖酸1,4内酯脱氢酶(Gal LDH)微量法
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参考价: 面议

具体成交价以合同协议为准
2022-03-14 10:50:33
240
属性:
CAS:详见说明书;纯度:详见说明书;分子量:详见说明书;分子式:详见说明书;供货周期:现货;规格:100管/96样;货号:GOY-01S6392;应用领域:化工;主要用途:产品仅用于科研;
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产品属性
CAS
详见说明书
纯度
详见说明书
分子量
详见说明书
分子式
详见说明书
供货周期
现货
规格
100管/96样
货号
GOY-01S6392
应用领域
化工
主要用途
产品仅用于科研
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上海谷研实业有限公司

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产品简介

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详细介绍

产品名称:L半乳糖酸1,4内酯脱氢酶(Gal LDH)微量法测试盒
规格100/96
测试方法微量法
货号:GOY-01S6392
分类:维生素代谢系列
商品介绍:
L-
半乳糖途径是合成AsA的主要途径。Gal LDH位于线粒体内膜,负责催化植物体内AsA生物合成的最后一步,也是该途径的关键酶之一,对植物体内AsA含量的积累起着至关重要的作用。

测定原理:

Gal LDH催化L-半乳糖内酯还原(Cyt c),还原型Cyt c550nm有吸收峰;测定还原型Cyt c增加速率,来计算Gal LDH活性。

自备仪器和用品:

台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液一:液体50mL×1瓶,4保存。
提取液二:液体50mL×1瓶,4保存。
试剂一:粉剂×1瓶,-20保存;临用前加入40mL试剂四充分溶解待用,用不完的试剂4保存;
试剂二:液体18μL×1瓶,4保存;临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4保存;
试剂三:粉剂×1瓶,-20保存;临用前加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4保存;
试剂四:液体50mL×1瓶, 4保存;
测定步骤
1
分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2
将试剂一、二、三37(哺乳动物)25(其它物种)预热10分钟。
3
加样表:

图1.jpg

样本的前处理
FBP酶提取:建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一,冰浴匀浆后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后48000g离心10min,取上清测定。
胞浆和叶绿体FBP酶的分离:按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)1510的比例(建议称取约0.1g样本,加入1mL提取液一),冰浴匀浆后于4200g离心5min,弃沉淀,取上清在48000g离心10min,取上清用于测定胞浆FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震荡溶解后超声破碎(冰浴,200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后48000g离心10min,取上清测定叶绿体中FBP酶活性。
建议测定总FBP酶活性,按照步骤提取粗酶液,若需要分别测定胞浆和叶绿体中的FBP,则按照步骤提取粗酶液。
FBP活性计算:
1)按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟生成1 nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
FBP
nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
2)按样本鲜重计算
单位的定义:每g组织每分钟生成1 nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
FBP
nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷ε×d×109]÷(W ×V÷V样总) ÷T=321.5×ΔA÷W
V
反总:反应体系总体积,1×10-3 LεNADPH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.1 mLV样总:加入提取液体积,1mLT:反应时间,5 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g
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