免疫荧光技术的实验步骤：

一、准备好试剂与仪器：

磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。

二、实验步骤

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，十分钟后弃去，使标本保持一定湿度。

2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间以三十分钟为参考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分钟，并不停地摇晃振荡。

4.取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。

商品属性：

规格 50ul 100ul 200ul

产品分类 抗体 / 一抗

英文名称 ：MAN1B1

英文别名  Alpha 1 2 mannosidase; Endoplasmic reticulum alpha mannosidase 1; Endoplasmic reticulum mannosyl oligosaccharide 1 2 alpha mannosidase 1; Endoplasmic reticulum mannosyl oligosaccharide 1 2 alpha mannosidase; ER alpha 1 2 mannosidase; Man9GlcNAc2 specific processing alpha mannosidase; MANA ER; Mannosidase alpha class 1B member 1.

英文别名  Human, Mouse, Rat, Pig, Horse

标记  Unconjugated

抗体来源  Rabbit

抗体类型  Polyclonal

免疫原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human MAN1B1

蛋白细胞定位  细胞浆,细胞膜

纯化方法  affinity purified by Protein A

亚型  IgG

性状  Liquid

浓度  1mg/ml

储存液  0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存条件  Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

背景资料 ：

抗体制备过程：

1.材料与试剂

a．提取的动物 Ig

b．弗氏佐剂和弗氏不佐剂

d．实验动物 兔

e．其它材料及试剂

2、选择实验活体。

3、进行动物免疫实验。

4、试取血样进行测试，查看免疫效果。

5、如果免疫成功，杀死实验活体，采集全部血清。

6、纯化出抗体。

7、鉴定抗体。胎牛血清（无菌采制）

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抗体分子标记技术：

（一）原理

当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为残基,残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。

（二）准备

1.试剂

经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体；0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5；无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5）；胺T反应终止缓冲液；

（三）操作要点

1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行；

2.如果氧化反应损伤蛋白质，可将抗体与异硫酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m，并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年；

4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天）；

5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低；

6.碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。

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