IKCA1（KCNN4）HEK293细胞系是表达人类IKCA1的工程化HEK293细胞，也称为KCNN4（中等电导钙激活钾通道蛋白4），IK1，hKCa4和hSK4，Genbank登录号NM_002250。该细胞系已通过使用膜电位敏感荧光染料（DiBAC4(3)）的细胞实验和西方印迹法对IKCA1表达进行验证。

背景

IKCA1，也称为中等电导钙激活钾通道蛋白4，IK1，hKCa4和hSK4，是可能的异源四聚体电压独立钾通道的一部分，该通道由细胞内钙激活。激活后会跟随膜超极化，促进钙内流。编码的蛋白可能是T淋巴细胞中主要的钙激活钾通道的一部分，但它也存在于内皮细胞和心脏成纤维细胞中。它们有助于血管平滑肌细胞增殖、迁移和心脏纤维化。在乳腺癌（BC）细胞中发现IKCA1高水平存在，耗竭后导致肿瘤形成减少。IKCA1可以被小分子调节，这些可能在BC和心血管疾病治疗中提供z疗机会。

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应用

在研究和药物发现过程中筛选和验证IKCA1的激动剂和拮抗剂。

细胞解冻

1. 从液氮储存中取出一个细胞小瓶。在准备好解冻之前，保持在干冰上。

2. 准备好解冻时，在37°C水浴中摇晃装有冷冻细胞的小瓶大约60秒。细胞解冻后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速将小瓶的全部内容转移到一个空的50毫升锥形管中。

注意：在37°C水浴中放置细胞过久将导致活性迅速丧失。

3. 使用10毫升的血清学移液管，慢慢向含有细胞的锥形管中加入10毫升预热的解冻培养基1。解冻培养基1应滴加同时轻轻摇晃锥形管，以实现温和混合并避免渗透冲击。

4. 立即以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在5毫升预热的解冻培养基1中重悬。

5. 将重悬的细胞转移到T25或T75培养瓶中，并在37°C、5% CO2培养箱中培养。

6. 培养24小时后，检查细胞附着和活性。更换培养基为新鲜的解冻培养基1，并继续在37°C、5% CO2培养箱中培养，直到细胞准备好分裂。

7. 细胞应在w全融合前传代。在s次传代及后续传代中，使用生长培养基1B。

细胞传代

1. 抽去培养基，用无Ca2+/Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗细胞，并用0.05% y酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1B并转移到试管中。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在生长培养基1B中重悬。

4. 按照推荐的亚培养比例1:10至1:20，每周一次或两次将细胞种入新的培养容器中。

细胞冷冻

1. 抽去培养基，用无Ca2+/Mg2+的PBS冲洗细胞，并用0.05% y酶/EDTA从培养容器中分离细胞。

2. 一旦细胞分离，加入生长培养基1B并计数细胞。

3. 以300 x g的速度离心细胞5分钟，去除培养基并将细胞在4°C冷冻培养基（BPS Bioscience #79796）中重悬，细胞浓度约为2 x 10^6个细胞/ml。

4. 将1 ml的细胞悬浮液分装到每个冷冻小瓶中。将小瓶放入保温容器中缓慢冷却，并在-80°C下保存过夜。

5. 次日将小瓶转移到液氮中长期保存。

注意：建议在早期传代时扩增细胞并至少冷冻10个小瓶以备将来使用。

图1. 离子霉素诱导的细胞内钙水平增加激活在IKCA1（KCNN4）HEK293细胞系中表达的IKCA1通道。

IKCA1（KCNN4）HEK293细胞和野生型HEK93细胞与DiBAC4(3)预孵化，然后用离子霉素（1 μM）处理。通过测量细胞荧光（λ激发485±10nm，λ发射528±10nm）监测通道激活。结果表明，用离子霉素处理的IKCA1-HEK293细胞由于通道激活引起的超极化而表现出荧光减少。值表示为添加离子霉素后/添加离子霉素前的细胞荧光。

文献参考：

Ghanshani S., et al., J Biol Chem. 275(47): 37137-37149.

Hoffman J.F., et al., 2003 PNAS 100 (12): 7366-7371.

de-Allie F.A., et al., 1996, Br J Pharmacol. 117(3):479-487.

Terstappen G.C., et al., 2003 Neurosci Lett. 346(1-2):85-88.

Gross D., et al., 2022 Cell Death and Disease 13:902.

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