TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒（B）是基于 TdT 末端转移酶能够在 DNA 的 3’端添加 dNTP 尾巴的原理而设计，该反应的示意图如下：

TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒（B）是在上述原理的基础上开发的，具有下列特点：
1. 快速，15 分钟即可完成标记反应。
2. 不但可用于单链 DNA 和 DNA Oligo 标记，还可用于 3’突出的双链
DNA 标记，但后者标记效率稍低。
3. 可用同位素底物和非同位素底物（生物素和标记的核苷酸等）。
4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带标记核苷酸三种
选择。
5. 同时提供非标记的 dATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺
入比例。
6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验（EMSA）、原位杂交（ISH）、Northern
Blot（不推荐用于低丰度 RNA 检测）、小 RNA Northern、Southern Blot
（不推荐用于单拷贝基因检测）、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。
规格及成分 成 份 编 号 5 次包装
TdT 缓冲液，5× 20 uL
TdT（末端转移酶，10 U/uL） 10 uL
dATP，2 mM 5 uL
标记核苷酸 （A、B、C 不同，见注）
超纯水 100935 1 mL
使用手册
90605s
c
1 份
注：A 型用于自选标记，用户需自备标记
核苷酸，本产品不提供标记核苷酸；B 型
提供 5 uL Biotin-11-dUTP；C 型提供含
5 uL DIG-11-dUTP。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年
自备试剂 DNA 模板
使用方法 1. 在 0.2 mL 微量离心管中按下表设置一个 20 uL 体系的标记反应（如果
需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针 DNA 的浓度）：
成份 用量
探针 DNA 100-200 pmol
TdT Buffer，5× 4 uL
标记核苷酸，1 mM
（A 型需自备标记核苷酸） 1 uL
dATP，2 mM （见下注）
TdT 末端转移酶（10 U/uL） 2 uL
超纯水 补到 20 uL
注: dATP 可以不加，但这样得到的加尾全部是标记核
苷酸，由于空间阻碍，灵敏度不一定*。如果杂交
效果不好，掺入一定比例的 dATP 到标记核苷酸中，
以控制标记的密度，提高比活。具体比例如何可以自
己优化。
2. 37℃反应 15 分钟，延长到 30 分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在，
一般可以加尾 3-5 个 Biotin 或 DIG 标记的核苷酸（标记物空间阻碍抑制
延长）；如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸 dATP（其他
dNTP 也可，只是本试剂盒只提供 dATP 而已），每条探针上可加上约 100
个核苷酸，平均含 5 个标记核苷酸
3. 70℃ 10 分钟灭活 TdT 酶。
4. 如果需要，可以 PAGE 电泳+银染（相关试剂需要另购）检测标记效率，
带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5. 如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非
同位素标记的探针，请不要酚/氯抽提，因为非同位素标记物一般会使
探针 DNA 进入有机相而丢失。
6. 使用时需将探针以 1-8 ng/uL 的终浓度加入到杂交液中（如果探针是双
链 DNA，加入前还需热变性）。如果不立即使用，非同位素标记的探针
DNA 可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针 DNA 不能放置。
关联产品 随机引物法 DNA 探针标记试剂盒（CAT#:90603）
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