产气荚膜梭菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）产品及特点 产气荚膜梭菌能引起人类食物中毒和抗生素相关性腹泻等, 广泛存在于自然界的土壤、水源及人和动物肠道中。目前根据产气荚膜梭菌产生的4 种重要的致病性毒素(α、β、ε、ι 毒素)能力, 可将其分为A(α)、B(α、β、ε)、C(α、β)、D(α、ε)和E(α、ι)型, 各型产气荚膜梭菌均含有α-毒素(CPa)基因。LAMP 等温
扩增（环介导等温扩增）利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA
聚合酶，在等温条件下(63℃左右) 30-60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异
性和检测范围等指标上能媲美甚至优于 PCR 技术，同时还不需要模板的热变
性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。本产品即
是针对产气荚膜梭菌 CPa 基因设计的LAMP特异引物组，采用环介导等温扩增
法结合荧光染料显色的体外扩增检测技术，适用于溶血性链球菌核酸的快速检
测。

产气荚膜梭菌核酸检测试剂盒（恒温荧光法）本试剂盒具有下列特点：
1. 高特异性，由于同时使用 4-6 条特异引物，所以特异性比 PCR 更高。
2. 高扩增效率，扩增效率可达到 10E9-10E10，比 PCR 灵敏一个数量级，可
检测到单拷贝的 DNA 分子
3. 65℃左右等温扩增，不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用，包含了除引物和模板 DNA 外的所有成份，十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果，不需要昂贵的电泳、荧光 PCR 等仪器。
6. 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。
规格及成分 成 份 编 号 50 次包装
LAMP Mix（2×） 11-180405a 0.5 mL
Bst DNA 聚合酶(8U/uL) 100209 75 uL
对照引物 11-180405b 40 uL
对照模板 DNA 11-180405c 5 uL
25 mM MgCl2 90302 0.2 mL
超纯水 100935 1 mL
使用手册 11-180405sc 1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂 模板及引物
使用方法 1. 在冰上溶解除酶外的各种组份，混匀，稍离心。在反应管中加入以下组份：
成份 样品管 阴性对照
LAMP Mix（2×） 10 uL 10 uL
FIP 引物终浓度 0.8 uM 0.8 uM
BIP 引物终浓度 0.8 uM 0.8 uM
F3 引物终浓度 0.2 uM 0.2 uM
B3 引物终浓度 0.2 uM 0.2 uM
Loop F 引物终浓度（可选项） 0.4 uM 0.4 uM
Loop B 引物终浓度（可选项） 0.4 uM 0.4 uM
MgCl2（25 mM） 3 uL 3 uL
模板 DNA 1-100ng 不加
Bst DNA 聚合酶(8U/uL) 1.5 uL 1.5 uL
补水到 20 uL 20 uL
注：如在反应管中加入本公司PCR级绿如蓝染料1uL（水则少加1 uL），则可
直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。
2. 混匀，置于60-65℃保温30-120分钟。注意：如果不使用Loop引物，则zui
保温2小时；如果使用Loop引物，则zui保温30分钟。
3. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。
4. 产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:
1) 琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5 uL，1-2%的琼脂糖凝胶电泳，可见
LAMP特征性电泳图谱；
2) 向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料（另售）1 uL，混匀，
稍离心。将反应管置于紫外透射仪或凝胶成像系统中，紫外灯下可见绿
色荧光产生；
3) 荧光定量检测。
5. 结果分析：
1) 如果没有扩增，则需要用本试剂提供的阳性对照进行扩增。本试剂盒提
供5次阳性对照，反应按下表设置：
成份 阴性对照管 阳性对照管
LAMP Mix（2×） 10 uL 10 uL
对照引物混合物 4.0 uL 4.0 uL
对照模板 DNA 不加 1 uL
MgCl2（25 mM） 3 uL 3 uL
Bst DNA 聚合酶(8U/uL) 1.5 uL 1.5 uL
水 1.5 uL 0.5 uL
混匀后，置于60℃保温120分钟，其余操作同上。注意：本对照引物中
没有Loop引物，所以zui保温2小时。
如果阳性对照能够扩增出，则说明试剂盒没有问题，可能是模板或引物的
问题。如果阳性对照没有扩增出条带，则是试剂盒的问题，请跟厂家。
注意事项 注意事项：
1. 引物设计对成功扩增十分关键。除用于 SNP 分型外，尽量以保守区设
计引物。
2. 引物至少包括 F3/B3 和 FIP/BIP，加入环状引物 F loop/B loop 可
以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC 含量和尽量避免二级结构。
4. 反应中各个引物的浓度及比例对扩增效果有一定的影响。
5. 建议先将所有引物混合在一起，配制成 10浓度以方便使用。
6. LAMP 扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备
等优点。但太高的灵敏度使得其比普通 PCR 扩增更加容易污染导致假
阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验
分区、添加 UNG 和 dUTP（可能导致反应效率下降）、使用荧光定量
等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，所有相关试剂必须全部更换，
必要时还得更换实验室。
7. 要确证扩增的为目标基因，可以使用特定的限制性酶切和 /或
Southern 杂交。
8. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品等用途。
关联产品 Bst DNA 聚合酶(CAT#:100209-800)
201