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Femto ECL 是一款具有特超高灵敏度的增强型化学发光(ECL)底物,也是我们ECL发光液中的灵敏度高的化学发光底物,由于采用了核心技术基于“荧光震荡”机理设计的发光底物系统。可通HRP实现实现低飞克级(以HRP浓度为准)的免疫印迹检测,其灵敏度,发光时间和背景均明显优秀。
灵敏—使用适当的一抗和二抗时,可在硝化纤维膜或PVDF膜上检测丰度为飞克级的蛋白条带
定量—所得信号的可定量检测范围跨越两个数量级
明亮信号—通过胶片或成像系统进行曝光,易于捕获图像
长信号持续时间—优化条件下,可检测的光信号输出长达8小时
稳定试剂—试剂盒组分能够在4°C条件下稳定放置一年,在室温下可稳定放置6个月
价格经济— 配方经过优化,可适用于浓度极低的抗体检测
1ng至0.2 µg/mL一抗(以1 µg/mL储存液稀释1:5,000至1:100,000倍)
2ng至10 ng/mL二抗(以1 µg/mL储存液稀释1:100,000至1:500,000倍)
当Femto ECL底物与优化的抗体浓度和封闭缓冲液配合使用时,可检测到常规ECL底物无法检测的低丰度靶标蛋白。
其他所需材料
已完成转印的印迹膜:用合适的电泳法分离蛋白质,并将这些蛋白质转移到硝酸纤维素膜上。
稀释缓冲液:使用Tris或磷酸盐缓冲液。
洗涤缓冲液:将5mL 10%的Tween-20加入1000mL稀释缓冲液(Tween-20的终浓度将0.05%)。
封闭试剂:将0.5mL10%的Tween-20加入100mL的封闭缓冲液,选择一种与稀释缓冲液具有相同基本组分的封闭缓冲液。
一抗: 选择一种目标蛋白质特异性抗体。使用稀释缓冲液制备该抗体的储存液。使用封闭试剂将抗体从储备液稀释成抗体工作液。最佳稀释度取决于一抗和膜上的抗原量。
HRP标记的二抗:选择一种与二抗特异性结合的HRP标记二抗,使用稀释缓冲液制备该抗体的储存液。使用封闭试剂将抗体从储备液稀释成抗体工作液。稀释度介于1:100000和1:500000之间或抗体工作液浓度为2~10ng/ml。该浓度范围在使用链亲和素-HRP时也适用。二抗的最佳稀释度取决于HRP标记二抗和膜上的抗原量。
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