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无需浪费珍贵的样品重新制胶电泳来检测不同的一抗,只需使用本抗体剥离缓冲液简单地处理膜,即可除去第一种一抗。通常此步骤只需 10~20 min,耗时多少依赖于膜上一抗的结合量。在抗体剥离之后,即可使用一种新的一抗进行重新检测。
使用说明:
2.完成 Western Blot 发光检测后,用 TBS/T 或 PBS/T 漂洗膜 5 min;加入 10~20 mL 剥离液覆盖膜。在摇床上漂洗 10~20 min。剥离时间视膜上抗体结合量的多少而定;3.4.倒掉剥离液,加入 TBS/T 或 PBS/T 漂洗膜 5 min。此时可在膜上滴上显色发光液以快速检验抗体剥离效果;用合适的封闭液重新封闭膜,即可再次杂交其它抗体;5. 使用本剥离液,膜可进行至少 10 次以上剥离而不会显著影响信号强度。以 GAPDH 为例子的实验显示,连续剥离 6 h,即相当于剥离 24 次 ( 以每次 15 min 计 ) 后,GAPDH 的信号没有显著降低。