DH5αλpir感受态细胞 10×100ul非电转

DH5α 感受态细胞说明书 
货 号：C1100                    
规 格：10×100ul / 20×100ul 
保 存：-70℃保存，运输为干冰包装。自收货之日起液氮保存至少一年，-70 ℃保存至少 6 个月。 
产品简介： 
本公司生产的DH5 α 感受态细胞是采用大肠杆菌DH5 α 菌株经特殊工艺制备得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC19 质粒检测，转化效率可达 108，-70 ℃保存3-5 个月转化效率不发生改变。 基因型:   supE44 △lacU169 （φ80 lacZ△M15 ）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1 
特   点:  一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重组缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的产物可与pUC 载体编码的  β-半乳糖苷酶氨基端实现β 互补，可用于蓝白斑筛选。 
操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行） 
1 、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以 100ul 感受态细胞为例。 
2 、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30 分钟。 
3 、将离心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒，然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟，注意不要摇动离心管。 
4 、向离心管中加入 500ul 无菌无抗的SOC 或LB培养基，37℃ 180rpm 振荡培养1 小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 
5 、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或LB平板，37℃倒置培养 12-16 小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100ul 左右的转化产物涂板；反之，如转化的 DNA总量较少，可取200-300ul 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的*较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4 ℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新的平板。 
注意事项：  
 1、感受态细胞应保存在-70 ℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。  
 2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。  
 3、转化时，转化效率与外源 DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。  
 4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/ 铺板DNA总量。  
 5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到低。 
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不同感受态细胞基因型不一样，因此有不同的用途：
1、DH5α 是实验室常用的感受态，用于克隆的，构建质粒，建库，保存质粒，等等。
2、DH10β可用于重组克隆的蓝/白斑筛选，允许构建更多具有代表性的基因组文库，可以增加质粒产量和数量
3、 Stbl3可以抑制重组，适合转化不稳定质粒，可用于保存慢病毒质粒。
4、JM109适合重复基因表达,分子克隆、质粒提取和蛋白质表达，可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。
5、 BL21（DE3）是常用来表达蛋白的，如果用于保存质粒，质粒会很不稳定。
快速转化操作方法 (10min)
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2.DH5αλpir 感受态细胞100ul*20价格从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。
3. 用200 μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。

产品类目：

1.细胞培养试剂,2.细胞培养耗材,3.蛋白质提取,4.蛋白质纯化,5.蛋白质定量,6.蛋白质电泳,7.蛋白质Marker,8.Western blot,9.免疫组化,10.抗体,11.SABC试剂盒,12.基因组和质粒提取试剂盒,13.核酸提取相关试剂,14.DNA电泳,15.DNA Marker,16.RNA相关试剂,17.PCR,18.Southern blot,19.基因工程,20.生物培养,21.碱基与核酸,22.氨基酸,23.多肽及蛋白质,24.酶,25.辅酶,26.酶抑制剂,27.维生素,28.抗生素,29.染色剂,30.糖与碳水化合物,31.生物缓冲液,32.植物生长激素,33.酸和盐分离效,34.胺,35.层析介质,36.常用生化试剂,37.其他生化试剂,38.耗材,39.标准品,40.新增产品