*0F感受态细胞规格

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行） 
1 、将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以 100ul 感受态细胞为例。 
2 、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的 DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30 分钟。 
3 、将离心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒，然后快速转移到冰浴中放置 2-3 分钟，注意不要摇动离心管。 
4 、向离心管中加入 500ul 无菌无抗的SOC 或LB培养基，37℃ 180rpm 振荡培养1 小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。 
5 、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的 SOC 或LB平板，37℃倒置培养 12-16 小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100ul 左右的转化产物涂板；反之，如转化的 DNA总量较少，可取200-300ul 的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的*较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4 ℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新的平板。 

●  一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
以下实验以100 μl感受态细胞为例。
*0感受态细胞  向感受态细胞悬液中加入目的DNA（100 μl 的感受态细胞能够被1 ng 超螺旋质粒DNA 所饱和），轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30 分钟。
3 将离心管置于42℃水浴中放置60-90 秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3 分钟，该过程不要摇动离心管。
4 向每个离心管中加入900 μl 无菌的SOC 或LB 培养基（不含抗生素）， 混匀后置于37℃摇床振荡培养1 小时（160-220 转/分钟），目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
*0F感受态细胞规格 将离心管内容物混匀，吸取100 μl 已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB 或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16 小时。
●  涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA 总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA 总量较少，可取200-300 μl 转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm, 2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）

注意事项：  
 1、感受态细胞应保存在-70 ℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。  
 2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它 DNA的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。  
 3、转化时，转化效率与外源 DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。  
 4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/ 铺板DNA总量。  
 5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到低。 
NMY51 感受态细胞100ul*50操作方法（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。