B834(DE3)感受态细胞  大肠杆菌系列

B834(DE3)感受态细胞简要说明：
CMbio JM109菌株来源于E.coli K strain，是提取高质量DNA的理想菌株，recA1 和 endA1 的突变有利于克隆DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。携带 hsdR17基因型背景，使得异源DNA不被内源核酸酶系统降解。laqI ^qZΔM15的存在使JM109可用于构建克隆，蓝白斑筛选实验；JM109感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率可达1×10⁹cfu/μg。
JM109感受态细胞操作说明：

1. CMbio JM109感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中），加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

1.  向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
JM109感受态细胞注意事项:

1.  CMbio 感受态细胞在冰上融化。
2.  混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。

B834(DE3)感受态细胞  大肠杆菌系列

操作步骤 （以下操作均按无菌条件的标准进行）

1. 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞 悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。 注意： 一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl， 可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不 要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以 100 μl感受态细胞为例。

2. 向感受态细胞悬液中加入目的DNA（100 μl的感受态 细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，轻弹混匀， 在冰浴中静置30 min。

3. 将离心管置于42℃水浴中放置60-90 sec，然后快速将 管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3 min，该过程不要摇 动离心管。 注意：此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需 十分准确，夏季或室温较高时，可放置5-8 min左右， 如果室温较低，可延长时间至8-15 min左右。条件允 许建议使用42℃热激方法。

4. 向每个离心管中加入900 μl 无菌的SOC或LB培养基 （不含抗生素）， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min (150 rpm)，目的是使质粒上相关的抗性标记基因 表达，使菌体复苏。 5. 将离心管内容物混匀，吸取100 μl已转化的感受 态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂 培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀 涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平 板，37℃培养12-16 h。 注意：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化 的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平 板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200- 300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较 少，可通过离心（4000 rpm, 2 min）后吸除部 分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。 （涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转 化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养 板）

不同感受态细胞基因型不一样，因此有不同的用途：
1、B834(DE3)感受态细胞  是实验室常用的感受态，用于克隆的，构建质粒，建库，保存质粒，等等。
2、DH10β可用于重组克隆的蓝/白斑筛选，允许构建更多具有代表性的基因组文库，可以增加质粒产量和数量
3、 Stbl3可以抑制重组，适合转化不稳定质粒，可用于保存慢病毒质粒。
4、JM109适合重复基因表达,分子克隆、质粒提取和蛋白质表达，可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。
5、 B834(DE3)感受态细胞  是常用来表达蛋白的，如果用于保存质粒，质粒会很不稳定。
快速转化操作方法 (10min)
1. 提前15分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。
2.B834(DE3)感受态细胞  从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手EP管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。
3. 用200 μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上，涂均匀，表面无水渍。
4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h。
快速热激转化操作方法 (25min,可提高转化效率)
1.B834(DE3)感受态细胞  从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手P管底轻轻混匀,，冰中静置5分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟 (晃动会降低转化效率)。加入700 μl 不含抗生素的LB，37℃，200 rpm 复苏10分钟，涂板 (均匀，表面无水渍)。
3. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15h