γ-谷氨酰半胱氨-酸连接酶（GCL）测试盒

微量法 100T/96S 

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 

测定意义： 

GCL 是 GSH 合成的限速酶，GSH 对 GCL 有反馈抑制作用。GCL 基因表达受多种因素调节，如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL 活性高低对 GSH 含量和 GSH/GSSG比值有重要影响。 

测定原理： 

在 ATP 和 Mg2+存在下，GCL 催化谷氨-酸和半胱氨-酸合成γ-谷氨酰半胱氨-酸；同时 ATP 去磷酸化产生无机磷分子，通过测定无机磷增加速率，即可计算出 GCL 活性。 

自备仪器和用品： 

冷冻离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、浓硫酸和蒸馏水。 

试剂组成和配制： 

试剂一：液体 105mL×1 瓶，4℃保存。 

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加 6 mL 蒸馏水充分震荡溶解。 

试剂三：粉剂×1 管，4℃保存。临用前加入蒸馏水 1.5 mL 充分震荡溶解。 

试剂四：液体 7mL×1 瓶，室温保存。 

试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 12 mL 蒸馏水，充分震荡溶解后，缓缓加入 400µL浓硫酸（自备），边加边搅拌。 

粗酶液提取： 

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。γ-谷氨酰半胱氨-酸连接酶（GCL）测试盒