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荧光法 100 管/96 样
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
S-CL主要来源于土壤微生物,S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。
测定原理:
4-羟甲基-7-香豆-素(MUB)在 365 nm 波长处激发, 能在 470 nm 处检测到荧光, 它与某些物质结合后荧光特性消失, 通过酶的水解作用MUB释放出来, 通过检测荧光量来表征酶活性。
自备仪器和用品:
多功能酶标仪、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 120mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。用前加 11 mL 蒸馏水充分溶解(可 50℃震荡溶解)。
试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。粗酶液提取:新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。
按照土壤质量(g):
试剂一 mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 土壤,加入 1mL 试剂一),振荡混匀。
测定步骤:
测定管:在震荡条件下取 100 μL 土壤悬液到 EP 管中,加入 100 μL 试剂二,30℃震荡避光培养 3 h,从中吸取 134 μL 到黑色不透光 96 孔板中,加入 66 μL 试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长 365 nm,测定波长 470nm。
对照管:取 100 μL 蒸馏水到 EP 管中,加入 100 μL 试剂二,30℃震荡避光培养 3 h,从中吸取 134 μL 到黑色不透光 96 孔板中,加入 66 μL 试剂三后用多功能酶标仪进行检测,激发光波长 365 nm,测定波长 470nm。 ΔA=A 测定-A 对照 土壤纤维素酶(S-CL)测试盒