LabFD PspGI(EcorII) 快速内切酶

货号：F5560S

储存条件：-20℃

同裂酶：EcoRII，MvaI，BstNI, BciT130I, BseBI, AjnI, Psp6I, Bst2UI

注： 同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

产品组成

产品简介

LabFD™快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5~15分钟内精确完成DNA切割的高保真限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。LabFD™快速内切酶具有如下特点：5~15分钟内即可完成酶切；共用一种酶切Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、连接试剂在LabFD™酶切Buffer中具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。

建议反应条件

1×LabFD™缓冲液；

37℃温育；

参照“DNA快速酶切流程”配制反应体系。

失活条件

80℃温育 20 min。

功能活性检测

最适反应温度下，在20ul反应体系中，1ul LabFD™PspGI能够在15min内wanquan消化1ugλDNA(Dcm^-)。

超长时间温育检测

最适反应温度下，将1ul LabFD™  PspGI与1ugλDNA(Dcm^-)共同温育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

最适反应温度下，使用1ul LabFD™  PspGI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量Fast T4 DNA Ligase可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

非特异性内切酶活性检测

最适反应温度下，将1ul LabFD™  PspGI与1 μg超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于10%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。

使用方法

1. DNA快速酶切流程

1) 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a. 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，DNA 聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆 等操作，建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。

2) 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

3) 75℃温育 15 min（质粒），或 15~30 min（PCR 产物），或 30~60 min（基因组 DNA）；

4) 酚氯仿抽提或柱纯化（可选）；

5) 如果使用 LabFD™ Color Buffer 进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。

2.双酶切或多酶切

1) 每种快速内切酶的用量为1ul，并根据需要适当扩大反应体系；

2) 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；

3) 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3.适用于质粒的扩大反应体系

注：如果总反应体系大于20ul，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自LABLEAD限制酶标准反应体系下的检测。