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检测原理:采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被白细胞介素16(IL-16)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素16(IL-16)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
IL试剂盒组成及其配置:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、5、10、20、40、80 pg/mL
1. 酶联板(Assay plate )
2. 标准品(Standard)
3.稀释液(Sample Diluent)
4.检测抗体-HRP(HRP-Conjugate reagent
5. 终止液(Stop Solution)
6. 底物溶液(Chromogen Solution)
7. 20x浓缩洗涤液(20X WashSolution)
8.说明书(User manual)
9.封板膜(Closure plate membrane)
10自封袋(Sealed bags)
注意事项:
1. 实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。
2. 加样:加样时,要控制加样速度,避免第一孔与最后一孔间的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响实验的准确性以及重复性。
3. 孵育:严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
4. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。
5. 建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。
6. 建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本)
IL试剂盒产品用途:
【灵敏度高】:由于抗体联结上了酶,因此借助于酶与底物的显色反应,显示抗原与抗体的结合,大大提高了检测的灵敏性,从而使检测水平接近放射免疫测定法。
【专一性强】:抗原和抗体的免疫反应是专一反应,而免疫酶技术以免疫反应为基础,所检测的对象是抗原(或抗体),使用的抗体除标记了酶以外,与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。