【摘要】：信号素4A（Semaphorin 4A，简称SEMA4A）是一种属于信号素家族（semaphorin family）的蛋白质，具有复杂的功能和多样的生物学作用。SEMA4A基因编码可溶性和跨膜蛋白信号素家族的成员，其产物是一种单程I型膜蛋白，包含免疫球蛋白样C2型结构域、PSI结构域和sema结构域。SEMA4A在组织器官发育过程中发挥重要作用，并且在成人的大脑、肺、肾、睾丸和脾脏中都有表达。此外，它在皮肤、淋巴节点等20多种其他组织中也有广泛表达。

实验需自备物品：

1.      酶标仪（450nm）

2.      高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.      37℃恒温箱

洗板方法：

1.  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

样品收集、处理及保存：小鼠信号素4A(SEMA4A)科研ELISA试剂盒

【细胞培养上清】：适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。

【血清】：在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。

【血浆】：应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20 分钟后，以1000×g离心15分钟，收集上清。

 【体液】：包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。

 【样本要求】：样品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

 【样本保存】：如果样品不能立即检测，应将其分装，-80 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

小鼠信号素4A(SEMA4A)科研ELISA试剂盒操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。