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兔子脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉ELISA试剂盒
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兔子脱氧吡啶酚/脱氧吡啶啉ELISA试剂盒
ELISA试剂盒操作步骤:
1. 加标准品:在酶标包被板上设标准品孔,ELISA试剂盒 依次加入不同浓度的标准品50ul(建议每个浓度做2个平行孔)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。大鼠ELISA试剂盒在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl,然后再加样品亲和素10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀.
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,大鼠ELISA试剂盒每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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标本的处理:
(1)细胞培养上清液:根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品,然后按照说明书所述方法检测。*稀释浓度是稀释5倍。
(2)脑脊液:根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品,然后按照说明书所述方法检测。*稀释浓度是5倍。
(3)血浆:①用EDTA2K离心收集在真空血液收集管中的血液,5,000×g,15分钟,4℃,分离血浆样品,然后储存在零下80℃直到使用。
性能:
1.准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2.灵敏度:zui低检测浓度小于10 pg/ml。
3.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性:板内、板间变异系数均小于15%。