Ca++Mg++ ——ATP酶测试盒微量法

本公司所有产品仅供科学实验，不做其他科学实验外的使用！
商品属性：

测定意义：

Ca++ Mg++-ATP 酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化 ATP 水解生成 ADP 和无机磷。

测定原理：

根据 Ca++ Mg++-ATP 酶分解 ATP 生成 ADP 及无机磷，通过测定无机磷的量来确定 ATP 酶活性高低。

需自备的仪器及用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：液体 100mL ×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 6mL 蒸馏水充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

试剂三：液体 2mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。用时加入 3mL 蒸馏水， 4℃保存。

试剂五：粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入 25mL 蒸馏水，溶解后 4℃保存一周。

试剂六：粉剂×1 瓶, 4℃保存。用时加入 25mL 蒸馏水，溶解后 4℃保存一周。

试剂七：液体 25mL×1 瓶，室温保存。

试剂八：10mmol/L 标准磷贮备液 10mL×1 瓶，4℃保存。

0.5μmol/mL 标准磷应用液配制：将试剂八 20 倍稀释，即取 0.1mL 试剂八加 1.9mL 蒸馏水充分混匀。

定磷剂的配制：按 H2O: 试剂五:试剂六:试剂七=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

样品酶液的制备：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，

加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

订购流程:

1、订购前,请与销售员核对产品中文名称/CAS号/英文名称等。

2、我司大部分产品都是现货,产品核实好下单后即可当天发货。(库存信息以当日为准)如有特殊要求请在发货前与销售员联系。

3、我司产品支持款到发货、快递代收尾款、网上现拍等付款方式。

4、质量保证,严格把关,如有产品异议经公司鉴定确认后可包换包退,免除客户后顾之忧。

5、我司提供完善的售后服务,使用过程中如有任何疑问,可提供技术指导。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 660nm，蒸馏水调零。

2、酶促反应（在 EP 管中加入下列试剂）

对照管 测定管

试剂一（μL） 65 45

试剂二（μL） 60 60

试剂三（μL） 20

样本 （μL） 100

混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）准确水浴 10min

试剂四（μL） 25 25

样本 （μL） 100混匀，8000g，25℃离心 10min，取上清液

3、定磷（在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂）空白管 标准管 对照管 测定管0.5μmol/ml 标准磷应用液（μL） 20

上清液（μL） 20 20

蒸馏水（μL） 20

定磷试剂（μL） 200 200 200 200

混匀，室温放置 30min，在 660nm 处，记录各管吸光值。

注意事项：

1、由于每一个样都必须做对照，本试剂盒 100 管只能测 48 份 Ca++ Mg++-ATP 酶。

2、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格无磷。避免磷污染是检测成败的关键。

3、空白管和标准管只要做一管。

Ca++ Mg++- ATPase 活力的计算：

1、血清（浆）Ca++ Mg++- ATPase 活力的计算:

定义：每小时每毫升血清（浆）中 Ca++ Mg++- ATP 酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。

Ca++ Mg++-ATP 酶活力（μmol/h/mL）= [C 标准管×V 总]×（A 测定管-A 对照管）÷（A 标准管-A 空白管）÷V 样÷T=7.5×（A 测定管-A 对照管）÷（A 标准管-A 空白管）

2、组织、细菌或细胞中 Ca++ Mg++- ATPase 活力的计算：

（1）按蛋白浓度计算：

定义：每小时每毫克组织蛋白中 Ca++ Mg++- ATP 酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。

Ca++ Mg++-ATP 酶活力(μmol/h / mg prot)= [C 标准管×V 总]×（A 测定管-A 对照管）÷（A 标准管-A 空白管）÷（V 样×Cpr）÷T =7.5×（A 测定管-A 对照管）÷（A 标准管-A 空白管）÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

定义：每小时每克组织中 Ca++ Mg++

-ATP 酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为一个酶活力单位。

Ca++ Mg++-ATP 酶活力(μmol/h /g 鲜重)=[C 标准管×V 总]×（A 测定管-A 对照管）÷（A 标准管-A 空白管）÷(W× V 样÷V 样总)÷T=7.5×（A 测定管-A 对照管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

定义：每小时每 1 万个细菌或细胞中 Ca++ Mg++-ATP 酶分解 ATP 产生 1μmol 无机磷的量为

一个酶活力单位。

Ca++ Mg++-ATP 酶活力(μmol/h /104cell)= [C 标准管×V 总]×（A 测定管-A 对照管）÷（A 标准

管-A 空白管）÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.015×（A 测定管-A 对照管）÷（A 标准管-A 空白管）

C 标准管：标准管浓度，0.5μmol/mL；V 总：酶促反应总体积，0.25mL；V 样：加入样本体

积，0.1mL ；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1/6 小时；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

生化试剂盒的使用注意事项：

选择合适的试剂盒：根据实验目的和检测对象选择合适的试剂盒，确保实验的准确性和可靠性。

严格遵循说明书：按照试剂盒的说明书进行操作，避免误用或浪费。

注意保存条件：按照试剂盒的保存条件进行妥善保存，避免阳光直射、高温或潮湿等不利因素。

控制实验条件：在实验过程中严格控制实验条件，如温度、时间、pH值等，以确保实验结果的稳定性。

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