正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

商品属性：

测定意义：

磷酸戊糖途径途径中 6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和 6PGDH 依次催化 NADPH 合成，与 能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外，6PGDH 逆境生理中具有重要作用。

测定原理：

6PGDH 催化 6-磷酸葡萄糖酸和 NADP +生成 NADPH，NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰，而 NADP +没有；通过测定 340nm 吸光度增加速率，计算 6PGDH 活性。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、酶标仪、96 孔板和蒸馏水。 

试剂的组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 19mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。

试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存。

组织样本的前处理：

1、细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量 （10 4个）：提取液体积（mL）为 1000~5000：1 的比例（建议 2000 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1. 酶标仪预热 30min，调节波长到 340 nm。

2 将试剂二和试剂三转移至试剂一中充分溶解；在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3. 取 96 孔板，依次加入 10μL 样本 190μL 试剂一，于 340nm 处测定 3min 内吸光值变化，

第 10 s 吸光值记为 A1，第 190s 吸光值记为 A2。△A=A2-A1

注意：空白管只需要做一次。 计算公式：

使用 96 孔板测定的计算公式如下

1、血清（浆）6PGDH 活力的计算:

单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。

6PGDH（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=2143.6×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 6PGDH 活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

6PGDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=2143.6×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

6PGDH（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=2143.6×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

6PGDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(2000×V 样÷V 样总) ÷T=1.072×ΔAV 反总：反应体系总体积，1×10

-3 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：

96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，3 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；2000：细菌或细胞总数，2000 万。

生化检测试剂盒实验操作说明：

一、抗氧化系列生化检测试剂盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧阴离子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）检测、总抗氧化能力（TAC）检测、植物原花青素(OPC)含量检测、植物类黄酮含量检测、植物总酚（TP）含量检测试剂盒。

氧化酶（XO）活性分析试剂盒为例，提供了一种简单易用的比色分析法，用于测定各种样品中的XO活性，特点是测定血清，血浆，组织/细胞裂解物和其他生物体液中的氧化酶活性，以及广泛的检测范围：15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化检测试剂盒

包括过氧化氢酶 (CAT) 活性分析、过氧化氢（H2O2）检测、脂质过氧化(丙二醛) 分析、蛋白质羰基含量检测、超氧阴离子含量检测等试剂盒。

蛋白质羰基含量检测试剂盒（比色法）为例，提供了一种简单易用的比色法，用于分析不同生物样品（细胞/组织裂解液，生物液体）中蛋白质羰基含量。在370 nm处有特征吸收峰。

特点是：1.测定组织样本、细胞、细菌、血清等中的蛋白质羰基含量。2.样本处理、实验步骤以及结果计算更加详尽准确精炼。3.保质期长。

三、抗逆系列生化检测试剂盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力检测、羟自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性检测、过氧化物酶(POD)活性检测等试剂盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力检测试剂盒为例，提供一种简单易用的比色测定法，用于定量测定血清，血浆，组织/细胞裂解液和其它生物体液中的SOD酶活性。

特点是：1.测定血清，血浆，组织/细胞裂解物和其他生物体液中的SOD酶活性。2.通过WST-8法测定SOD活性，zui大抑制率可接近100％，不受一些常见干扰因素的干扰。3.广泛的检测范围：3.13- 200U/mL。

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