3磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒微量法
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上海谷研实业有限公司主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的销售,主营产品:生化试剂、试剂盒、ELISA试剂盒、抗体、重组蛋白、生化检测试剂盒、分光光度法检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、细胞株、原代细胞、细胞培养基、标准溶液产品。销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司产品。
公司客户遍布大学、研究所、医院、卫生、商品检验检疫、制药公司、生物技术公司和食品工业等单位。
公司主推品牌： （进口、国产） Amresco 、Sigma、 Peprotech 、Corning 、BD Faclon 、Axygen、 Invitrogen、 Qiagen、 Hyclone 、Uscnlife、 Wako 、SantaCruz、sciencell、Gibco、R&D、Linco、Amersham、Millipore。
详细信息
本公司所有产品仅供科学实验，不做其他科学实验外的使用！
商品属性：
货号 | GOY-SH102 | 检测方法 | 微量法 |
规格 | 100管/96样 | 产品类别 | 糖酵解系列 |
测定意义：
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化 1，3-二磷酸甘油酸转变为 3-磷酸甘油酸，产生 1 分子 ATP，具有影响 DNA 复制和修补及刺激病毒 RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。
测定原理
3-磷酸甘油酸激酶催化 3-磷酸甘油酸和 ATP 产生 1,3-二磷酸甘油酸和 ADP，1,3-二磷酸甘油酸在 3-磷酸甘油醛脱氢酶和 NADH 作用下产生 3-磷酸甘油醛、NAD 和磷酸，340nm 处的吸光度变化反映了 3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
试剂组成和配制
提取液：液体 100mL×2 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 2mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1 支，-20℃避光保存。临用前加 1mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1 支，-20℃避光保存。临用前加 1 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 4 mL 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 酶液提取
①总 PGK 酶提取：建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，500g 离心 5min，取上清测定。
②胞浆和叶绿体 PGK 酶的分离：按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5～10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液），冰浴匀浆后于 4℃，500g 离心 5min，弃沉淀，取上清在 4℃，8000g 离心 10min，取上清用于测定胞浆 PGK 酶活性，取沉淀加 1mL
提取液，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s，间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，500g 离心 5min，取上清测定叶绿体中 PGK 酶活性。
建议测定总 PGK 酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的 PGK，则按照步骤②提取粗酶液。
测定步骤:
1.分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2. 取微量石英比色皿/96 孔板，依次加入 100μL 试剂一，20μL 试剂二，10μL 试剂三，10μL 试剂四，40μL 试剂五，20μL 粗酶液，充分混匀，记录 340nm 处 10s 的吸光值 A1 和 310s 的吸光值 A2，△A=A1-A2
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PGK（nmol/min /g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10
3 L / mol /cm；d：比
色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反
应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
PGK（nmol/min /g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=643.08×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10
3 L / mol /cm；d：比
色皿光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反
应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
生化试剂盒的使用注意事项：
选择合适的试剂盒：根据实验目的和检测对象选择合适的试剂盒，确保实验的准确性和可靠性。
严格遵循说明书：按照试剂盒的说明书进行操作，避免误用或浪费。
注意保存条件：按照试剂盒的保存条件进行妥善保存，避免阳光直射、高温或潮湿等不利因素。
控制实验条件：在实验过程中严格控制实验条件，如温度、时间、pH值等，以确保实验结果的稳定性。
公司正在出售的产品：
乙醇酸氧化酶测试盒 | H2S含量测试盒 |
3磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒 | Na+k+ ——ATP酶测试盒 |
BCA蛋白法含量测试盒 | NADH氧化酶(NOX)测试盒 |
Ca++Mg++ ——ATP酶测试盒 | NADP磷酸酶(NADPase)测试盒 |
6磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)测试盒 | NADP苹果酸酶(NADPME)测试盒 |
ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒 | 抗淋巴细胞毒抗体检测试剂盒 ALA/LCA ELISA Kit |
ADP含量测试盒 | 人1,25-二羟基3ELISA试剂盒 |
AMP含量测试盒 | 人1,4,5-三磷SUAN肌醇ELISA试剂盒 |
3磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒 | 人11去氢血栓烷B2ELISA试剂盒 |
6磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)测试盒 | 人15脂加氧ELISA试剂盒 |
ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒 | 人17羟孕酮ELISA试剂盒 |
ADP含量测试盒 | 人2,3-二磷SUAN甘油SUANELISA试剂盒 |
AMP含量测试盒 | 3磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒微量法人25羟基3ELISA试剂盒 |
ATP含量测试盒 | 人3-硝基酪氨SUANELISA试剂盒 |
ATP柠檬酸裂解酶(ACL)测试盒 | 人3型1-磷SUAN鞘氨醇受体ELISA试剂盒 |
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