ADPG焦磷酸化酶(AGP)测试盒微量法

本公司所有产品仅供科学实验，不做其他科学实验外的使用！
商品属性：

测定意义：

AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸与 ATP 反应生成淀粉合成的直接 前体 ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。

测定原理

AGP 催化的逆向反应生成 G1P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢 酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH，340nm 下测定 NADPH 增加速率，即可计算 AGP 活性。

需自备的的仪器和用品

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、 研钵、冰和蒸馏水

试剂的组成和配制

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存;

试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 9mL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装 后-20℃保存，禁止反复冻融；

试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 4mL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分装 后-20℃保存，禁止反复冻融；

粗酶液制备 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

订购流程:

1、订购前,请与销售员核对产品中文名称/CAS号/英文名称等。

2、我司大部分产品都是现货,产品核实好下单后即可当天发货。(库存信息以当日为准)如有特殊要求请在发货前与销售员联系。

3、我司产品支持款到发货、快递代收尾款、网上现拍等付款方式。

4、质量保证,严格把关,如有产品异议经公司鉴定确认后可包换包退,免除客户后顾之忧。

5、我司提供完善的售后服务,使用过程中如有任何疑问,可提供技术指导。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、试剂一置 30℃保温 10min 以上。

3、在 EP 管中按顺序加入下列试剂

试剂名称（μL） 测定管

试剂一 50

试剂二 80

样本 10

混匀，30℃保温 15 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴迅速冷却后，4000g4℃

离心 5min，取上清液，在 96 孔板中依次加入下列试剂

上清液 80

试剂一 85

试剂三 35

混匀后，立即于 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，计算ΔA=A2-A1。

AGP 活性计算

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

1、按样本蛋白蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。

AGP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109

]÷(V 样×Cpr) ÷T×稀释倍数=2813×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

AGP（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109

]÷（W× V 样÷V 样总）÷T×稀释倍数=2813×ΔA÷W

V 反总：反应体系总体积，2×10-4

L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：

比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：

反应时间，2 min；稀释倍数：1.75；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。

b.使用 96 孔板测定的计算公式如下：

1、按样本蛋白蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。

AGP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109

]÷(V 样×Cpr) ÷T×稀释倍数=5627×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

2、按照样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。

AGP（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109

]÷（W ×V 样÷V 样总）÷T×稀释倍数=5627×ΔA÷W

V 反总：反应体系总体积，2×10-4

L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：

96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：

反应时间，2 min；稀释倍数：1.75；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。

生化试剂盒的使用注意事项：

选择合适的试剂盒：根据实验目的和检测对象选择合适的试剂盒，确保实验的准确性和可靠性。

严格遵循说明书：按照试剂盒的说明书进行操作，避免误用或浪费。

注意保存条件：按照试剂盒的保存条件进行妥善保存，避免阳光直射、高温或潮湿等不利因素。

控制实验条件：在实验过程中严格控制实验条件，如温度、时间、pH值等，以确保实验结果的稳定性。

公司正在出售的产品：