正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

商品属性：

测定意义：

α-L-Af 是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残基的糖苷酶类，使细胞壁阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖等中性糖不断解离，促进果胶的增溶和降解。由于果实成熟过程中常常伴随着阿拉伯糖的丧失，该酶活性在果实成熟软化中的研究具有重大意义。
测定原理：
α-L-Af分解对硝基酚阿拉伯呋喃糖苷生成对-硝基苯，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-L-Af活性。
自备用品：
酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 2.5mL 蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂

仍-20℃保存。

试剂二：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 13mL×1 瓶，4℃保存。

组织样本的前处理：

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量

（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 400nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在 EP 管或 96 孔板中依次加入下列试剂）：

试剂名称（μL） 测定管 对照管

试剂一 25

蒸馏水 25

试剂二 35 35

样本 10 10

迅速混匀，放入 37℃保温 30min

试剂三 130 130

充分混匀， 400nm 处测定吸光值 A，计算 ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。

α-L-Af 活性计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y =0.00585x -0.0027；x 为标准品浓度（nmol/mL），y 为吸光值。

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每 min 产生 1nmol 对-硝基苯定义为一个酶活性单位。

α-L-Af 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T

=39.89×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每小时产生 1nmol 对-硝基苯定义为一个酶活性单位。

α-L-Af 活性(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=39.89×(ΔA+0.0027) ÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1nmol 对-硝基苯定义为一个酶活性单位。

α-L-Af 活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.08×(ΔA +0.0027)

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.07mL；V 样：加入反应体系

中样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g； 500：细胞或

细菌总数，500 万；T：反应时间，30min。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0039x -0.0027；x 为标准品浓度（nmol/mL），y 为吸光值。

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每小时产生 1nmol 对-硝基苯定义为一个酶活性单位。

α-L-Af 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V 反总]÷(V 样×Cpr)÷T

=59.83×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每小时产生 1nmol 对-硝基苯定义为一个酶活性单位。

α-L-Af 活性(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=59.83×(ΔA+0.0027) ÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1nmol 对-硝基苯定义为一个酶活性单位。

α-L-Af 活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)÷T

=0.12×(ΔA +0.0027)

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.07mL；V 样：加入反应体系

中样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g； 500：细胞或

细菌总数，500 万；T：反应时间，30min。

生化检测试剂盒实验操作说明：

一、抗氧化系列生化检测试剂盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧阴离子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）检测、总抗氧化能力（TAC）检测、植物原花青素(OPC)含量检测、植物类黄酮含量检测、植物总酚（TP）含量检测试剂盒。

氧化酶（XO）活性分析试剂盒为例，提供了一种简单易用的比色分析法，用于测定各种样品中的XO活性，特点是测定血清，血浆，组织/细胞裂解物和其他生物体液中的氧化酶活性，以及广泛的检测范围：15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化检测试剂盒

包括过氧化氢酶 (CAT) 活性分析、过氧化氢（H2O2）检测、脂质过氧化(丙二醛) 分析、蛋白质羰基含量检测、超氧阴离子含量检测等试剂盒。

蛋白质羰基含量检测试剂盒（比色法）为例，提供了一种简单易用的比色法，用于分析不同生物样品（细胞/组织裂解液，生物液体）中蛋白质羰基含量。在370 nm处有特征吸收峰。

特点是：1.测定组织样本、细胞、细菌、血清等中的蛋白质羰基含量。2.样本处理、实验步骤以及结果计算更加详尽准确精炼。3.保质期长。

三、抗逆系列生化检测试剂盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力检测、羟自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性检测、过氧化物酶(POD)活性检测等试剂盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力检测试剂盒为例，提供一种简单易用的比色测定法，用于定量测定血清，血浆，组织/细胞裂解液和其它生物体液中的SOD酶活性。

特点是：1.测定血清，血浆，组织/细胞裂解物和其他生物体液中的SOD酶活性。2.通过WST-8法测定SOD活性，zui大抑制率可接近100％，不受一些常见干扰因素的干扰。3.广泛的检测范围：3.13- 200U/mL。

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