原果胶含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

货号：BC3680

规格：50T/24S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 提取液一：80%乙醇，自备。即将80 mL无水乙醇和20 mL蒸馏水混合。

2、 试剂一：浓硫酸60 mL，自备。

3、 标准品：10 mg半乳糖醛酸，临用前加入0.943 mL提取液三，配成50 μmol/mL的标准液。

产品说明：

果胶是植物细胞壁主要组成成分之一，分为水溶性果胶和不溶性果胶，不溶性果胶为原果胶。原果胶是不溶于水的物质，但可在酸、碱、盐等化学试剂及酶的作用下，加水分解转变成水溶性果胶，在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。

原果胶在碱性条件下水解为可溶性果胶，并进一步转化为半乳糖醛酸，产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物，在530nm处有特征吸收峰。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

取约0.1g样本，加入1mL 提取液一，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5mL 提取液一和丙酮交替各洗2遍（涡旋振荡2min左右，4000g 25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL提取液二（去除淀粉）浸泡15小时，4000g 25℃离心10min，弃上清，加入1mL提取液三，充分匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清液待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。

2、 将50μmol/mL标准液用提取液三稀释为0.7、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL的标准溶液备用。

3、 操作表：

三、原果胶含量的计算

1、 标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为x轴，其对应的ΔA标准为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得到x（μmol/mL）。

2、 原果胶含量的计算：原果胶含量(μmol/g 质量)=x×V提取液三÷W =x÷W

V提取液三：加入提取液三的体积，1mL；W：样本质量，g。

注意事项：

1、 浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。

2、 若ΔA超过0.6，可将样本用提取液三进行适当稀释再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

实验实例：

1. 取0.1g木槿加入1mL 提取液一，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5mL 提取液一和丙酮交替各洗2遍（涡旋振荡2min左右，4000g 25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL提取液二浸泡15小时，4000g 25℃离心10min，弃上清，加入1mL提取液三，充分匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清液之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定=A测定管-A对照管=0.194-0.044=0.15，依据标准曲线y=0.9322x-0.0232，计算X=0.1858μmol/mL；按样本质量计算含量得：原果胶含量(μmol/g 质量)= x÷W=1.858 μmol/g 质量。

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