谷*甘肽过氧化物酶活性检测试剂盒

谷*甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1190
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前取一瓶加入1.65mL蒸馏水溶解，2-8℃可保存2周；

2. 试剂一工作液：临用前根据样本数量按照试剂一：稀释液=1:1的比例进行配制，现用现配；

3. 试剂二工作液：液体放于试剂瓶内EP管中，使用前先离心。临用前按2 μL试剂二：10 mL蒸馏水的比例稀释试剂二，现用现配；

4. 试剂三：瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；

5. 试剂四：若试剂有析出可40℃加热溶解，也可震荡促进溶解；

6. 标准品：10 mg还原型谷*甘肽。临用前加入0.405 mL蒸馏水溶解为80 μmol/mL的标准溶液备用，2-8℃可保存4周。

产品说明：
谷*甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px或GPX，EC.1.11.1.9）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。GPX能够催化还原型谷*甘肽（GSH）生成氧化型谷*甘肽（*），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。

GPX催化H₂O₂氧化GSH，产生*，GSH能与DTNB生成在412nm处有特征吸收峰的化合物，412nm下吸光度的下降即可反应GPX的活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。  
需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、天平、台式离心机、1 mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器/超声破碎仪、EP管。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件

实验实例：

1. 取0.1 g小鼠肝脏组织加入1 mL提取液进行匀浆研磨，取上清稀释40倍后再按照测定步骤操作，用玻璃比色皿测得A测定管=0.108，A对照管=0.303，A标准管=0.491，A空白管=0.033，计算∆A测定=A对照管-A测定管=0.195，∆A标准= A标准管-A空白管=0.458，按样本质量计算酶活得：

GPX (U/g 质量)=200×ΔA测定÷ΔA标准÷W×40（稀释倍数）=34061 U/g。

1. 取0.1 g杨树叶片加入1 mL提取液进行匀浆研磨，用玻璃比色皿测得A测定管=0.220，A对照管=0.318，A标准管=0.491，A空白管=0.033，计算∆A测定=A对照管-A测定管=0.098，∆A标准=A标准管-A空白管=0.458，按样本质量计算酶活得：

GPX (U/g 质量)=200×ΔA测定÷ΔA标准÷W=428 U/g。
相关发表文献：

1. Yang Yang,Li Jing,Wei Cong,et al. Amelioration of nonalcoholic fatty liver disease by swertiamarin in fructose-fed mice. Phytomedicine. June 2019; 59.(IF4.18)

2. Xuejuan Xia,Yuxiao,Xing,Guannan Li,et al. Antioxidant activity of whole grain Qingke (Tibetan Hordeum vulgare L) toward oxidative stress in d-galactose induced mouse model. Journal of Functional Foods. June 2018;(IF3.197)

3. Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen,et al. Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development. Toxicological & Environmental Chemistry. Feb 2019;(IF3.547)

4. Wang H, Li Y Y, Qiu L Y, et al. Involvement of DJ1 in ischemic preconditioninginduced delayed cardioprotection in vivo[J]. Molecular medicine reports,  2017, 15(2): 995-1001

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