BC0180-50T/48S-半*氨酸（Cys）含量测试盒氨基酸代谢_氨基酸代谢系列-北京索莱宝科技有限公司手机版

详细介绍

半*氨酸（Cys）含量检测试剂盒说明书详见附件
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0180
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体25 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂一	液体45 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×2瓶	2-8℃保存
标准品	粉剂×1瓶	2-8℃保存

溶液的配制：

试剂二：用前一天，向试剂二中加5 mL蒸馏水充分溶解，再加磷酸1.25 mL，混匀后盖紧（防止水分散失）沸水浴2h；冷却后加20 mL蒸馏水，4℃可保存2周。（一瓶即可做50T，为延长试剂盒使用时间，故多给一瓶）
标准品：10 mg半*氨酸。将标准品加入4.13mL蒸馏水得到20μmol/mL的标准液。4℃可以保存4周。

产品说明：
蛋白质含有三种含硫氨基酸：甲*氨酸、*氨酸和半*氨酸（Cys）。其中，Cys是一种含有巯基的含硫氨基酸，从甲*氨酸转化而来，并且可与*氨酸互相转化。Cys参与蛋白质二硫键的形成，经常是蛋白质活性中心的组成部分，还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外，Cys大量积聚在皮肤和粘膜表面，在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性，并且补充巯基，以维持皮肤的正常代谢，调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
Cys还原磷钨酸生成钨蓝，在600nm处有吸收峰；通过测定600nm吸光度，计算Cys含量。
技术指标：
检出限：0.0053 μmol/mL
线性范围：0.03125-3 μmol/mL
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、磷酸和蒸馏水。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

液体样本中半*氨酸提取：

取0.2mL液体样本，加提取液0.3mL，充分混匀，11000rpm 4℃离心10min，取上清液待测。

组织中半*氨酸提取：

称取约0.2g组织，加入0.5mL提取液，冰上充分研磨，11000rpm 4℃离心10min，取上清液待测。
二、测定步骤

分光光度计预热30 min以上，调节波长到600nm，蒸馏水调零。
标准液的配制：用蒸馏水将20μmol/mL的标准液稀释为2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625 μmol/mL浓度的标准溶液。
按下表加入各试剂

试剂名称（μL）	测定管	标准管	空白管
样本	200	-	-
标准品	-	200	-
蒸馏水	-	-	200
试剂一	500	500	500
试剂二	300	300	300

混匀后室温静置15min，于600nm处测定吸光值。
三、半*氨酸含量计算

标准曲线的绘制：

以各标准溶液浓度为x轴，以∆A（A标准管-A空白管）为y轴做标准曲线，得到方程y=kx+b。将（A测定管-A空白管）带入方程求x值。

半*氨酸含量计算：

（1）按液体样本的体积计算
半*氨酸含量（μmol/mL）=x×V样总÷V=2.5x
（2）按样本质量计算
半*氨酸含量（μmol/g 质量）=x×V样总÷W=0.5x÷W
V：液体样本体积，0.2mL；V样总：提取体系体积，0.5mL；W：样本质量，g。
注意事项：
如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
相关发表文献：

Huang Q, Wang M, Xia Z. The SULTR gene family in maize (Zea mays L.): gene cloning and expression analyses under sulfate starvation and abiotic stress[J]. Journal of plant physiology, 2018, 220: 24-33.
Yansha Han,Mengyang Wu,Lihong Hao,et al. Sulfur dioxide derivatives alleviate cadmium toxicity by enhancing antioxidant defence and reducing Cd²⁺ uptake and translocation in foxtail millet seedlings. Ecotoxicology and Environmental Safety. August 2018;(IF4.527)

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