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白蛋白含量检测试剂盒（溴甲酚紫显色法）说明书
可见分光光度法
货号：BC5820
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
提取液 | 液体60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂一 | 液体0.24 mL×1支 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 2-8℃保存 | |
试剂三 | 液体0.8 mL×1支 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体1 mL×1支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
1、 显色液：临用前根据样本数量按照试剂一：试剂二：试剂三=10μL: 3990μL :40μL（4040μL，4T）的比例配制显色液，充分混匀，现配现用；
2、 标准品：10mg/mL白蛋白标准液。临用前取50μL10mg/mL白蛋白标准液，加入150μL提取液，配制成2.5mg/mL白蛋白标准液，现配现用。
产品说明：
白蛋白是人体血浆中最主要的蛋白质，由肝脏合成，是人体内一种重要的营养物质，可以维持血浆渗透压，并可与多种营养物质、激素和药物相结合。白蛋白含量可以反映机体营养状态，也可排查影响肝脏代谢功能的疾病，如肝硬化、肝损伤、营养不良、恶性肿瘤等。
在酸性环境下，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚紫（Bromocresol Purple，BCP）结合生成绿色复合物，在603nm处有特定吸收峰，该复合物吸光值与白蛋白浓度成正比。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、分析天平、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 组织样本：按质量（g）: 提取液体积（mL）1 : 5~10比例加入提取液（建议称取0.1g样本，加入1.0mL提取液），冰浴匀浆后，于4℃，8000g，离心10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。
2. 细菌/细胞样本：按细菌/细胞数量（106）：提取液体积（mL）5~10: 1的比例加入提取液（建议5百万细菌/细胞加入1.0mL提取液），冰浴超声破碎细菌/细胞（功率200W，超声3s，间隔7s，总时间5min），然后于4℃，8000g，离心10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。
3. 液体样本：直接测定。若液体有浑浊则离心取上清测定。
二、测定步骤
1．可见分光光度计预热30min以上，调节波长至603nm，蒸馏水调零。
2．操作表：（1mL玻璃比色皿中加入下列试剂）
试剂名称（μL） | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
样本 | 100 | - | - |
标准品 | - | 100 | - |
提取液 | - | - | 100 |
显色液 | 1000 | 1000 | 1000 |
混匀，常温静置1min，于603nm处测定各管吸光值，分别记为A测定、A标准和A空白，计算ΔA测定=A测定-A空白，ΔA标准=A标准-A空白。空白管和标准管只需测1-2次。 注意：静置时间长短会影响检测结果，建议直接在1mL玻璃比色皿中直接反应1min，测定吸光值。 | |||
三、白蛋白含量计算
1. 按样本蛋白浓度计算
白蛋白含量（mg/mg prot）= ΔA测定×（C标÷ΔA标准）×V样÷（V样×Cpr）=2.5×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
2. 按样本质量计算
白蛋白含量（mg/g 质量）= ΔA测定×（C标÷ΔA标准）×V样÷（W×V样÷V样总）=2.5×ΔA测定÷ΔA标准÷W
3. 按细菌/细胞数量计算
白蛋白含量（mg/106 cell）=ΔA测定×（C标÷ΔA标准）×V样÷（V样×N÷V样总）=2.5×ΔA测定÷ΔA标准÷N
4. 按液体体积计算
白蛋白含量（mg/mL）= ΔA测定×（C标÷ΔA标准）×V样÷V样= 2.5×ΔA测定÷ΔA标准
C标：标准管浓度，2.5mg/mL；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；N：细菌/细胞总数，以106计。
注意事项：
1、 如果∆A测定小于0.005或测定管吸光值接近空白管，可以增加样本量后再进行测定；如果∆A测定大于0.5，建议将样本上清用提取液适当稀释后再进行测定。注意同步修改计算公式。
2、 如果样本加入显色剂后出现浑浊，建议将样本上清用提取液适当稀释后再进行测定。注意同步修改计算公式。
实验实例：
1. 取100μL人血清样本，用提取液稀释10倍，按照测定步骤操作，用1mL玻璃比色皿测得计算：ΔA测定=A测定-A空白=0.524-0.121= 0.403，ΔA标准=A标准-A空白=0.387-0.121=0.266，按液体体积计算得：
白蛋白含量（mg/mL）=2.5×ΔA测定÷ΔA标准×10 =37.876 mg/mL。
参考文献：
[1] Tada S, Yasukawa K, Yatomi Y, et al. A simple colorimetric assay to determine the concentration and proportion of human mercaptalbumin[J]. Practical Laboratory Medicine, 2022, 31: e00281.
[2] Muramoto Y , Matsushita M , Irino T .Reduction of reaction differences between human mercaptalbumin and human nonmercaptalbumin measured by the bromcresol purple method[J].Clinica Chimica Acta, 1999, 289(1-2):69-78.
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