SOLARBIO/索莱宝 品牌
生产厂家厂商性质
北京市所在地
尿蛋白含量检测试剂盒说明书(丽春红比色法)
可见分光光度法
货号:BC565
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 液体1 mL×1支 | -20℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一工作液:临用前根据样本数量按照试剂一:蒸馏水=0.25mL:2.25mL(2.5mL,1T)的比例配制试剂一工作液;
2、 标准品:5mg/mL BSA标准液。临用前取80μL 5mg/mL BSA标准液,加入920μL蒸馏水,配制成0.4 mg/mL BSA标准液,现用现配。
产品说明:
尿液中蛋白含量增加,表明肾脏系统的重吸收作用减弱,通常可作为肾脏疾病临床诊断的辅助依据。
在尿液样本中加入蛋白沉淀剂和丽春红染料,离心得到的蛋白质-染料复合物可溶解于碱性溶液,检测其在560nm处的吸光值可计算得到样本蛋白含量。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、5mL EP管、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理
1. 尿液等液体样本:直接测定。若有浑浊请离心后取上清置于冰上待测。
二、测定步骤
1.可见分光光度计预热30min以上,调节波长至560nm,蒸馏水调零。
2.操作表:
充分混匀,3500rpm常温离心10min,弃全部上清,留全部沉淀。 | |||
试剂二 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
震荡充分溶解沉淀,于560nm处测定各管吸光值,分别记为A测定、A标准和A空白,计算ΔA测定=A测定-A空白,ΔA标准=A标准-A空白。空白管和标准管只需测1-2次。 |
三、尿蛋白含量计算
尿蛋白含量(mg/mL)= ΔA测定×(C标÷ΔA标准)×V样÷V样= 0.4×ΔA测定÷ΔA标准
C标:标准管浓度,0.4mg/mL;V样:加入样本体积,1mL。
注意事项:
1、 实验过程中离心步骤结束后,上清液需要全部除去,同时不可损失沉淀,否则会影响比色结果。
2、 如果∆A测定小于0.004或测定管吸光值接近空白管,可以增加样本量后再进行测定;如果∆A测定大于0.3,建议将样本用蒸馏水适当稀释后再进行测定。注意同步修改计算公式。
参考文献:
[1] Michael A Pesce, Carl S Strande. A new micromethod for determination of protein in cerebrospinal fluid and urine[J]. Clinical Biochemistry, 1973, 19(11): 1265-1267.
[2] Jean Dube, Joel Girouard, Pierre Leclerc. et al. Problems with the estimation of urine protein by automated assays[J]. Clinical Biochemistry, 2005, 38(5): 479-485.
[3] Pan Ya. An analysis about the quantitative measurement of urinary protein[J]. China Health Standard Management, 2014, 5(18): 125-126.
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