血清总铁结合能力（TIBC）检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2860
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂四：临用前根据用量将A液和B液按1:1混合，当天用完；

2. 标准品：临用前加0.9mL蒸馏水溶解，得到40μmol/mLFeSO₄溶液，2-8℃可保存8周。

产品说明：
血清总铁结合能力指血清转铁蛋白可结合铁的能力，其含量高低与缺铁性贫血、急性肝炎等疾病的发生密切相关。
Fe²⁺与菲洛嗪反应形成紫红色化合物，在562nm处有特征吸收峰。碱性条件下，血清转铁蛋白可以与Fe³⁺结合，可以被还原成Fe²⁺，此时吸光度A1与未结合Fe³⁺数量正相关；酸化后，转铁蛋白结合的Fe³⁺释放，并且进一步被还原成Fe²⁺，此时吸光度A2与总Fe³⁺数量正相关。A2减A1与TIBC呈正比。


技术指标：
低检出限：第一次测量的检出限为0.0002 μmol/mL；第二次测量的检出限为0.0017 μmol/mL。
线性范围：第一次测量的线性范围为0.00195-0.5 μmol/mL；第二次测量的线性范围为0.00195-0.5 μmol/mL。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、1mL玻璃比色皿、EP管、蒸馏水。
操作步骤：

• 测定步骤（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、标准溶液的稀释：取10μL 40μmol/mLFeSO₄标准液，加入1590μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.25μmol/mL标准液使用，现用现配。（实验中每管需要100μL，为减小实验误差，故配制大体积。）
2、分光光度计预热30min以上，调节波长至562nm，蒸馏水调零。
3、试剂一37℃预热10min。
4、样本测定（在EP管中加入下列试剂）

二、血清总铁结合力计算
总铁结合能力定义：37℃条件下，每升血清结合Fe³⁺的μmol数。
总铁结合能力TIBC（μmol/L）=C标准×ΔA2测÷ΔA2标-C标准×ΔA1测÷ΔA1标
=250×（ΔA2测÷ΔA2标-ΔA1测÷ΔA1标）
C标准：标准液浓度，0.25μmol/mL=250μmol/L。
注意事项：
1. A1测小于0.1时，建议将样本用蒸馏水适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
2. 试剂二、试剂四有一定的毒性，操作时请做好防护措施。
实验实例：

1. 取100μL用蒸馏水稀释4倍的骆驼血清，按照测定步骤操作，测得计算ΔA1测=A1测-A1空=0.356，ΔA1标=A1标-A1空=0.669，ΔA2测=A2测-A2空=0.819，ΔA2标=A2标-A2空=0.519，计算总铁结合能力得：总铁结合能力TIBC（μmol/L）=250×（ΔA2测÷ΔA2标-ΔA1测÷ΔA1标）×4=1045.897 μmol/L。

2. 取100μL用蒸馏水稀释8倍的鹅血清，按照测定步骤操作，测得计算ΔA1测=A1测-A1空=0.588，ΔA1标=A1标-A1空=0.669，ΔA2测=A2测-A2空=0.797，ΔA2标=A2标-A2空=0.519，计算总铁结合能力得：总铁结合能力TIBC（μmol/L）=250×（ΔA2测÷ΔA2标-ΔA1测÷ΔA1标）×8=1313.443 μmol/L。

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