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土壤蔗糖酶( S-SC)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:BC0240
规格:50T/24S 土壤蔗糖酶检测试剂盒 可见分光光度法 土壤蔗糖酶检测试剂盒 可见分光光度法
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
试剂一 | 液体5 mL×1瓶(自备) | 2-8℃保存 |
试剂二 | 液体15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
试剂三 | 粉剂×2瓶 | 2-8℃保存 |
试剂四 | 液体35 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品 | 粉剂×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:自备甲苯;
2、 试剂三:临用前取1瓶加入15 mL蒸馏水充分溶解备用,用不完的试剂2-8℃保存2周;
3、 标准品:临用前加入1 mL蒸馏水溶解备用,2-8℃可保存2周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。
产品简介:
S-SC能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收,其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、磷含量,微生物数量及土壤呼吸强度密切关,是评价土壤肥力的重要指标。
S-SC催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在540nm有特征光吸收,在一定范围内540nm光吸收增加速率与S-SC活性成正比。
Sucrose Reducing Sugare 3-Amino-5-Nitrosalicylic Acid (540nm)
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、30-50目筛、冰、研钵、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,研磨,过30-50目筛。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2. 标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释至0.5、0.4、0.3、0.2、0.1 mg/mL,可参考下表。
序号 | 稀释前浓度(mg/mL) | 标准液体积(µL) | 蒸馏水体积(µL) | 稀释后浓度(mg/mL) |
1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
2 | 1 | 250 | 250 | 0.5 |
3 | 1 | 200 | 300 | 0.4 |
4 | 1 | 150 | 350 | 0.3 |
5 | 1 | 100 | 400 | 0.2 |
6 | 1 | 50 | 450 | 0.1 |
备注:实验中每个标准管需200µL标准溶液。
3. 加样表:
试剂名称 | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
风干土样(g) | 0.1 | 0.1 | - | - |
试剂一(μL) | 15 | 15 | - | - |
振荡混匀,使土样全部湿润,37℃水浴或恒温培养箱放置15min - | ||||
试剂二(μL) | 250 | 250 | - | - |
试剂三(μL) | 750 | - | - | - |
蒸馏水(μL) | - | 750 | - | - |
混匀,放入37℃水浴或恒温培养箱培养24小时,10000g,4℃,离心5min,取上清液,将培养结束的上清液稀释10倍(取0.1mL上清液,加入0.9mL蒸馏水)若后续测定吸光值仍大于1.5继续稀释。
| ||||
上清液(μL) | 200 | 200 | - | - |
标准液(μL) | - | - | 200 | - |
蒸馏水(μL) | - | - | - | 200 |
试剂四(μL) | 500 | 500 | 500 | 500 |
充分混匀,放入沸水浴中煮沸5min(盖紧,缠封口膜以防止水分散失),流水冷却后充分混匀。
540nm处蒸馏水调零,取全部反应液于1mL玻璃比色皿中,读取吸光值A,分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管(每个测定管需设一个对照管),ΔA标准=A标准管-A空白管。标准曲线和空白管只需测1-2次。
三、S-SC活性计算
1、标准曲线的建立:
根据标准管的浓度(x,mg/mL)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(y,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x,mg/mL)。
2、S-SC活性计算:
单位的定义:37℃,每天每g土样中产生1mg还原糖定义为一个S-SC活力单位。
S-SC活力(U/g 土样)= x ×10×V反总÷W÷T=101.5x
10:稀释倍数;T:反应时间,1d;V反总:反应体系总体积,1.015mL;W:样本质量,0.1g。
相关发表文献:
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参考文献:
[1] Gao M, Song W, Zhou Q, et al. Interactive effect of oxytetracycline and lead on soil enzymatic activity and microbial biomass[J]. Environmental toxicology and pharmacology, 2013, 36(2): 667-674.
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