植物氨态氮含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

货号：BC1520

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前将试剂三倒入使其充分溶解备用。该试剂溶解后10天内有效。

2、 试剂二：临用前加2 mL蒸馏水充分溶解。

3、 标准品：10 mg半*氨酸，临用前加入1.157 mL提取液，得到1000 μg/mL 氮标准液。

产品说明：

氮素是构成生物体的一种必需元素。氨态氮进入植物细胞后形成氨基酸或酰胺，植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。

氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在570nm有特征吸收峰；通过测定570nm吸光度，来计算氨基酸含量。

技术指标：

低检出限：5.5847 μg/mL

线性范围：25-300 μg/mL

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，室温匀浆后于25℃，12000g离心10min，取上清待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。

2. 将1000μg/mL 氮标准液用提取液分别稀释为300、200、100、50、25μg/mL。

3. 操作表：

混匀后盖紧瓶盖封口膜封口（防止水分散失），置于沸水浴中保温10min，冷却后反复颠倒EP管数次，将测定管8000rpm离心5min后取上清，于570nm测定吸光值。显色后务必在30min内测完。计算ΔA=A测定管-A空白管，ΔA标准=A标准管-A空白管。

三、植物氨态氮含量计算

1. 标准曲线的绘制：

以各个氮标准液为横坐标，其对应的ΔA标准为纵坐标，建立标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA带入方程中，得到x（μg/mL）。

2. NH₃-N含量的计算：

（1）按样本质量计算：NH₃-N含量（μg/g 质量）=x×V提取÷W=x÷W

（2）按蛋白浓度计算：NH₃-N含量（μg/mg prot）=x×V提取÷（Cpr×V提取）=x÷Cpr

W：样本质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；V提取：样本提取液总体积，1mL。

注意事项：

为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验，如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

相关发表文献：

[1] Fuyuan Zhu,Moxian Chen,Wailung Chan,et al. SWATH-MS quantitative proteomic investigation of nitrogen starvation in Arabidopsis reveals new aspects of plant nitrogen stress responses. Journal of Proteomics. September 2018; (IF3.537)

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