Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒_生化试剂产品-南京赛泓瑞生物科技有限公司手机版

详细介绍

Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒（膜联蛋白A5-PE细胞凋亡检测试剂盒）（胎盘抗凝蛋白-PE细胞凋亡检测试剂盒）

凯基Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒

（Annexin V-PE Apoptosis Detection Kit）

Cat number：KGA For Research Use Only

Store at4℃ for one year

Expire date：

一、试剂盒说明

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素PE标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。可与7-AAD联合使用。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不*用于检测组织样本）。

二、试剂盒组份

组份	Cat: KGA1011 10 assays	Cat: KGA1012 20 assays	Cat: KGA1013 50 assays	Cat: KGA1014 100 assays	储存条件
AnnexinV-PE	10μL	20μL	50μL	100μL	4℃避光
Binding Buffer	5 mL	10.0 mL	25 mL	50 mL	4℃

三、试剂盒以外自备仪器和试剂

流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器

1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含EDTA的胰酶消化液

四、使用注意事项

1．微量试剂取用前请离心集液。

2． Annexin V-PE避光保存及使用。

3．本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×10⁵^，，不*用于检测组织样本。

4． *使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。

5．细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。

6．因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

五、操作方法

1．悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集（注：胰酶消化时间不易过长，否则容易引起假阳性）；

2．用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×10⁵细胞；

3．加入500μL的Binding Buffer悬浮细胞；

4．加入1μL Annexin V-PE混匀；

5．室温、避光、反应5～15min；

6．请在1 hour内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。

A． 荧光显微镜观察

1．滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；

2．对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；

（1）将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；

（2）用PBS洗涤细胞两次；

（3）在500μL 的Binding Buffer中加入1μL Annexin V-PE混匀；

（4）将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；

（5）避光、室温反应5 min。

3．将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下滤光片（罗丹明）观察

Annexin V-PE荧光信号呈橙红色。

B． 流式细胞仪分析

用流式细胞仪检测，激发波长Ex=488 nm; 发射波长Em=578 nm。

Annexin V-PE的橙红色荧光建议使用FL2通道检测。

荧光补偿调节：使用未经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。

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