DNA Ladder检测试剂盒_细胞生物学产品-南京赛泓瑞生物科技有限公司手机版

详细介绍

凯基细胞凋亡DNA Ladder检测试剂盒

（ApotosisDNA Ladder Detection Kit）

Cat number：KGA For Research Use Only

Store at-20℃ for one year

Expire date：

一、试剂盒说明

细胞核染色质DNA断裂是细胞凋亡的标志特征。在细胞发生凋亡时，核酸内切酶被激活，选择性降解染色质DNA，形成50-300 kb的大片段，并进而在核小体连接处断裂，形成180-200 bp或其整倍数的DNA片段，这些DNA片段可从细胞中提取出来，通过琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶染色呈现为梯状条带（DNA Ladder），并据此判断细胞凋亡产生。凯基细胞凋亡DNA Ladder检测试剂盒提供了一种简便、快速地提取染色质DNA的方法，并增加对小片段DNA的回收，从而增强了检测的敏感性。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不*用于检测组织样本）。

二、试剂盒组份

组份	Cat:KGA111（20 assays）	Cat:KGA112（50 assays）	Cat:KGA113（100 assays）	储存条件
Lysis Buffer	4 mL	10 mL	20 mL	4℃
Solution A	400μL	1.0 mL	2.0 mL	-4℃
Enzyme A	400μL	1.0 mL	2.0 mL	-20℃
Enzyme B	400μL	1.0 mL	2.0 mL	-20℃
Precipitant	3.0 mL	6.5 mL	13.0 mL	4℃
Loading Buffer	80μL	0.2 mL	0.4 mL	4℃

三、试剂盒以外自备仪器和试剂

高速离心机、微量移液器、涡旋振荡器、凝胶电泳仪、37-55℃水浴

1.5m L Microtube、PBS、胰酶消化液、冰乙醇、TE Buffer，琼脂糖，TBE、溴化乙啶、DNA Ladder Marker

四、使用注意事项

1. DNA Ladder出现在细胞凋亡晚期，观察细胞形态已发生皱缩出芽，染色质*凝聚，细胞核已固缩断裂的凋亡晚期形态，建议该种形态的凋亡细胞比例在30%以上时进行DNA Ladder检测或*行Tunel检测，

2. DNA Ladder出现在一个较短的时间段，在凋亡早期取样，则无DNA降解的条, 带，而在凋亡末期取样则产生与细胞坏死相似的DNA弥散条芾。因此取样时间需根椐不同种类的细胞和诱导剂而摸索确定。

3. 贴壁细胞不用胰酶消化而用细胞刮收集。

4. 某些细胞不产生这种核小体间的DNA断裂，而是产生50-300kb的大片段断裂。

五、操作方法

1．离心收集10⁵~10⁶细胞（1500×g，离心5min）于1.5mL微量离心管中；

2．用PBS洗涤细胞二次（1500×g，离心5min），弃上清；

3．沉淀的细胞中加入100μL Lysis Buffer，涡旋振荡器上剧烈混合10秒， 1000×g，离心5min后移上清于另一1.5mL微量离心管中；

4．沉淀再加入100μL Lysis Buffer重复上步，合并两次的上清液；

5．在上述合并的上清液中加入20μL Solution A，再加入20μL Enzyme A， 55℃反应1小时；

6．加入20μL Enzyme B,37℃孵育1小时；

7．加入130μL Precipitant和950μL冰乙醇, 混匀，置—20℃,1小时以上或过夜；

8． 4℃，12，000-14，000 rpm离心15-30min，小心地弃去上清，收集沉淀的DNA；

9．加入0.5mL 70%的冷乙醇，洗DNA沉淀，再12，000-14，000 rpm离心20min；

10．弃上清，DNA沉淀于室温干燥10 min后，加入10-15μL TE Buffer，充分搅拌溶解DNA；

11．取上述10-15μL样品加入2-3μL Loading Buffer， 1.5%琼脂糖凝胶电泳（凝胶和电泳缓冲液TBE均加入0.5μg/mL的溴化乙啶）；

12．5V/cm电泳1小时，紫外灯下观察并拍照。

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