活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒
（ Normal/Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit）
Cat number：KGA For Research Use Only
Store atRT for one year
Expire date：
一、试剂盒说明
细胞坏死和凋亡是两种截然不同的细胞学现象，二者发生的过程在形态学上有很大的区别。在细胞坏死时，细胞膜发生渗漏，细胞内容物包括细胞器以及染色质释放到胞外。而在细胞凋亡过程，起始阶段，染色质固缩、分离并沿核膜分布，细胞质亦发生固缩，但细胞膜依然完整未失去选择透性；在凋亡后期，核染色质断裂为大小不等的片断，与某些细胞器如线粒体一起聚集，为反折的细胞膜所包围，以后逐渐分离，形成凋亡小体。
本产品提供的染料可以分别对正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞的细胞核进行染色。其染色原理为：Dye Reagent 1只进入活细胞，正常的细胞核及处于凋亡早期的细胞核呈现绿色；Dye Reagent 2只能进入死细胞，将死细胞以及凋亡晚期的细胞核染成橙色。因此通过在荧光显微镜下观察细胞显色和形态的不同，可以同时将正常细胞、坏死细胞、凋亡早期细胞和凋亡晚期细胞区分开来。
二、试剂盒组份
| 组份 | Cat: KGA501 （50 assays） | Cat: KGA502 （100 assays） | 储存条件 |
| Dye Reagent 1 | 25μL | 50μL | 室温避光 |
| Dye Reagent 2 | 25μL | 50μL | 室温避光 |
三、试剂盒以外自备仪器和试剂
荧光显微镜（510nm激发波长）、载玻片、盖玻片、1.5m L Microtube、微量移液器
四、注意事项
1. Dye Reagent 1、2及Mixed Dyes Reagent有毒，操作时请戴手套；
2. 根据需要检测的实际样品数在使用前将两种染料混合，剩余混合染液注意避光保存留待下次使用；
3. 利用血球计数板进行该项操作时，不要用血计板配套的那种质地较硬的盖玻片，而用普通的盖玻片反而更利于结果的观察。
五、操作方法
1. 用适当的方法诱导细胞凋亡；
2. 用PBS洗涤细胞二次，并配成浓度为5×105~6×106cells/ml细胞悬液；
3. 将Dye Reagent 1和Dye Reagent 2等体积混合形成Mixed Dyes Reagent（见注意事项2）；
4. 吸取25μL的细胞悬液同1μL的Mixed Dyes Reagent轻轻混匀；
5. 吸取上述10μL的混合液置于一洁净的载玻片，并用盖玻片盖上细胞（见注意事项3）；
6. 荧光显微镜510nm激发波长观察，分别对下列四类细胞进行计数，注意细胞总量须超过200个。
正常细胞：细胞呈圆形，核质体被均匀染成绿色，大小形状较单一；
坏死细胞：细胞呈椭园形，核质体被均匀染成橙黄色，大小形状较单一；
凋亡早期细胞：核质体呈绿色，细胞形状不规则，如呈新月形，；
凋亡晚期细胞：核质体呈橙色，染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，大小不一，可见胞质芽状突
