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公司产品仅用于科研具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点,咨询并订购!
产品名称 | 规格 | 货号 |
SOC培养基粉剂 | 1L | FS-R6411 |
产品分类:培养基
储存条件 4℃,12个月
用途 转化的热激处理后恢复培养
注意事项 在SOB培养基中添加葡萄糖,粉剂溶解于水后,如要求无菌,应过滤除菌。
配制与标定的实验原理:
1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一种白色晶体粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室温溶解度为0.02g/100g H2O。
2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂,基准试剂的预处理:称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层,然后用水洗净,烘干。
配制步骤:
1、取适量锌片放在100mL烧杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自来水、纯水洗净,烘干、冷却。
2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15~0.2g Zn,盖好小表面皿。
3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地将溶液转移至250mL容量瓶中,用纯水稀释至标线,摇匀。
实验方法与判定:
1.对照品溶液的稳定性
2.对照品溶液的配制:精密量取脑对照品适量,加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液,作为对照品溶液。
3.色谱条件:以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱;柱温120℃;进样口温度250℃;检测器温度250℃;分流进样,分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。
4.实验方法:配制的对照品溶液,一份置冷处保存,一份置室温中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液,三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法,并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来,保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%,验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。
血小板反应蛋白(THBS1)THBS1 ELISA Kit色CYP3A抗体包装25g
血栓调节蛋白(TM)TM ELISA Kit色cP450 CYP20A1抗体包装5g
血清淀粉样蛋白A2(SAA2)SAA2 ELISA Kit色cP4501B1抗体包装1g
血清淀粉样P物质(SAP)SAP ELISA Kit色cP450 CYP26A1抗体包装5g
血红氧合2(HO2)HO2 ELISA Kit磷化周期E抗体包装100mg
血红氧合1(HO1)HO1 ELISA Kit磷化周期E2抗体包装5g
血红蛋白(HB)HB ELISA Kit周期M3抗体包装1g
血管抑(ANG)ANG ELISA Kit周期Y/X抗体包装250mg
血管性血友病因子(vWF)vWF ELISA Kit磷化周期D3抗体包装1g
血管细胞粘附分子1(VCAM1)VCAM1 ELISA Kit色b5还原3抗体包装1g
血管生成样蛋白7(ANGPTL7)ANGPTL7 ELISA KitCWC22蛋白抗体包装250mg
血管生成样蛋白3(ANGPTL3)ANGPTL3 ELISA Kit9号染色体开放阅读框95抗体包装5g
血管生成样蛋白2(ANGPTL2)ANGPTL2 ELISA Kit19号染色体开放阅读框67抗体包装10MG
血管生成样蛋白1(ANGPTL1)ANGPTL1 ELISA Kit磷化酪蛋白激1γ1+γ2+γ3抗体包装100ml
血管生成4(ANGPT4)ANGPT4 ELISA Kit原卟啉氧化3抗体包装25ml
ADP核糖基化因子结合蛋白抗体泛交叉反应蛋白(UCRP)N/A
SOC培养基粉剂Phospho-FRA1 (Ser265) /FITC 荧光标记兔抗人、大、小鼠化FRA-1蛋白IgG3,3-二烯 98%
FSCN1/FITC 荧光标记纤维束蛋白同源物1/肌动蛋白集束蛋白/圆线虫紫癜 IgG4-(二氨) 99%
FSH/FITC 荧光标记促卵泡激IgG3-氨巴豆酯 99%
FSH-R/FITC 荧光标记促卵泡激受体IgG3,3-二烯酯 98%
FSP/Spastin/FITC 荧光标记抗纤维母表面抗原IgG克罗通 97%
FST/FITC 荧光标记抗卵泡抑IgG盐坦索罗辛 98%
F1 operon positive regulatory protein(NT)/FITC 荧光标记鼠疫耶尔森氏菌F1荚膜蛋白(N端)IgG三丁膦 95%
F1 operon positive regulatory protein(CT)/FITC 荧光标记鼠疫耶尔森氏菌F1荚膜蛋白(C端)IgG3-(异酰氧)氧硅烷 97%
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。